Betydelsen av utvecklingen av nedströmsprocess (DSP)
Hela fermentationsbruket innehåller målprotein eller plasmid, samt produkt- och processrelaterade föreningar, t.ex. aggregeringar, mikrobiella cellsubstrat, Värdcellproteiner (HCP), Värdcelldna (HCD), endotoxin och antibiotika.
Därför är det avgörande att designa en effektiv DSP, reningsprocess, för att ta bort vissa föreningar och producera höggradigt renad och högkvalitativ drogstoff. Dessutom kan optimeringen av reningsprocessen hjälpa till att öka produktåtervinning, minska kostnader och förbättra processens skalbarhet och reproducerbarhet.
Nyckelord: processutveckling, optimering och validering, reningsprocess, kromatografi, borttagning av föreningar, HCP-borttagning, HCD-eliminering, endotoxinborttagning, proteindenaturering och refaldning, VLP-sammansättning, konjugering
Tillämpning: Biomedicinsk industri, humant medicin, djurmedicin, vaccin, rekombinant större molekylbiologiska produkter, rekombinant biologiska produkter, biologisk reagens
DSP-lösningar från Yaohai Bio-Pharma
Vi har omfattande erfarenhet av att isolera målproteiner eller plasmider från komplexa matriser genom att utveckla och optimera nedströmsreningsprocessen. Det finns olika typer av enhetsoperationer som är lämpliga för reningsprocessen av biologiska produkter, inklusive centrifugeringsfiltrering, homogenisering, alkalisk lysis, ultrafiltrering, sedimentation, proteindenaturering och refaldning, kromatografi, etc.
Våra tillgängliga reningsutvecklings tjänster inkluderar:
- Utveckling av hela reningsprocessen från cell- eller supernatantsamling till den slutliga aktiva ingrediensen.
- Optimering av reningsprocessen baserad på produkt- och processrelaterade föreningar för att öka produktkvalitet och säkerhet, t.ex., HCP, HCD, endotoxin.
- Definition och optimering av nyckelparametrar i en eller flera enhetsoperationer, inklusive celllyser, tangentialflödesfiltrering, resinscreening, kromatografi, proteindenaturering och refaldning, etc.
- Optimering av processen med avseende på kvalitet, utbyte, återvinning, kostnad och skalbarhet.
- Validering av nedströmsreningsprocessen.
- Riskbaserad utvärdering av parameterspann och Design of Experiments (DoE) i processmodellering.
Tjänstdetaljer
Standardiserade protein- eller plasmidreningsplattformar bygger på flera grova reningssteg och mindre än 4 kromatografisteg, inklusive kapning, mellanreningssteg och slutlig polering.
| Tjänstdetaljer |
Enhetshandlingar |
Parametrar |
| Grovrening |
Centrifugeringsprocess |
Rotationshastighet, Tid |
| Högtryckshomogenisering |
Totalt fasthalt, Tryck, Cykler |
| Kontinuerlig alkalisk lysning |
Förhållandet mellan upplösta celler och lysningslösning, Lysningstid |
| Tangentiell flödesfiltrering |
Membranmaterial och porstorlek, Födanströmning, Transmembrantryck (TMP), Förhållandet mellan filtratvolym och membranarea |
| Precipitering |
Typ och koncentration av precipitant, Additiv, pH, Temperatur, Tid |
| Denaturering och refaldning |
Inklusionskroppsproublibilisering |
Denatureringskonsentration (t.ex., Urea, Guanidin HCl, Stark jonisk tvättmedel), Tvättmedel (t.ex., Sodium dodecyl sulfate, SDS), Reducerande ämnen (t.ex., Dithiothreitol, DTT), Chelatörer (Ethylenediaminetetraacetsyra, EDTA), Temperatur, Tid |
| Proteinrefaldning |
Refaldningsmetoder (utläggning, dialys eller SEC-refaldning), Proteinhalter, Buffer, pH, Temperatur, Tid, Oxiderande och reducerande ämnen (t.ex., Glutation, GSH/Oxiderad glutation, GSSH, DTT/GSSH, Cystein/Cystin), Små molekylära tillägg (L-arginin, Urea, Guanidin/HCl, och Tvättmedel) |
| Fångst, Mellanpürering och Slutföring |
AC (Affinitetskromatografi) |
Flera typer av kromatografikolumn/resin (t.ex., AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Kolumnlängd och diameter, Buffersammansättning, Injektionsvolym, Mobil fas sammansättning (Adsorption och Desorption), pH, Flöde, Bindning, Spölning och Elutionsvillkor. |
| IEX (Anion- eller Kationväxlingskromatografi) |
| HIC (Hydrofob interaktion kromatografi) |
| Avsaltning och/eller storleksexklusionskromatografi (SEC) |
| RPC (Reversed Phase Chromatography) |
| MMC, Mixed mode chromatography |
Fallstudie
Fall 1
Vi har uppdraget att utveckla och optimera nedströmsrensningsprocessen för att höja proteinpuretén från 85% till 90% samtidigt som vi minskar antalet kromatografi-steg.
Yaohai levererade en robust och skalbar rensningsprocess med tre kromatografisteg för målproteinet, en bakteriell allergi. Den slutgiltiga puretén uppnådde 95%.
Fall 2
Yaohai utsågs av vår klient att optimera processen för borttagning av endotoxiner för virusliknande partiklar (VLP) vaccin.
Vår grupp utförde optimering av kromatografiparametrar och förberedde ett medicinskt ämne med en renhet på 98% och endotoxinresidu på 12,8EU/mg.
Vår erfarenhet
- Vi har varit inblandade i utvecklingen och tillverkningen av olika stora molekyler, inklusive rekombinanta subenhetsvacciner, VLP:er, hormoner (insulin, GLP-1, växtfrämmande hormon), cytokiner (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21),växtfrämmande faktorer (EGF, FGF, NGF), nanokroppar/enkeldomänantikroppar (sdAbs), enzym, etc.
Utrustning
Vi använder branschledande AKTA Pure, AKTA Avant och Preparativa HPLC-system för att utföra olika kromatografi-metoder, inklusive affinitetskromatografi, jonbyte, hydrofob interaktion, omvänd fas och storleksexkluderande kromatografi.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
