Betydelsen av utveckling av nedströmsprocesser (DSP).
Hela fermenteringsbuljongen innehåller målprotein eller plasmid, såväl som produkt- och processrelaterade föroreningar, t.ex. aggregat, mikrobiella cellsubstrat, värdcellsproteiner (HCP), värdcells-DNA (HCD), endotoxin och antibiotika.
Därför är det avgörande att utforma en effektiv DSP, reningsprocess, för att ta bort vissa föroreningar och producera högrenade och högkvalitativa läkemedelssubstanser. Dessutom kan optimeringen av reningsprocessen hjälpa till att öka produktåtervinningen, minska kostnaderna och förbättra processens skalbarhet och reproducerbarhet.
Nyckelord: processutveckling, optimering och validering, reningsprocess, kromatografi, föroreningseliminering, HCP-borttagning, HCD-eliminering, endotoxin-borttagning, proteindenaturering och återveckning, VLP-sammansättning, konjugering
Användning: Biofarmaceutisk industri, humanmedicin, djurmedicin, vaccin, rekombinanta biologiska medel med stor molekyl, rekombinanta biologiska läkemedel, biologiska reagens
DSP Solutions of Yaohai Bio-Pharma
Vi har lång erfarenhet av att isolera målproteiner eller plasmider från komplexa matriser genom att utveckla och optimera nedströms reningsprocess. Det finns olika typer av enhetsoperationer som är lämpliga för rening av biologiska läkemedel, inklusive centrifugering, filtrering, homogenisering, alkalisk lysering, ultrafiltrering, utfällning, proteindenaturering och återveckning, kromatografi, etc.
Våra tillgängliga reningsutvecklingstjänster inkluderar:
- Utveckling av hela reningsprocessen från cell- eller supernatantuppsamling till den slutliga aktiva ingrediensen.
- Optimering av reningsprocessen baserat på produkt- och processrelaterade föroreningar för att öka produktkvalitet och säkerhet, t.ex. HCP, HCD, endotoxin.
- Definition och optimering av nyckelparametrar i en eller flera enhetsoperationer, inklusive cellys, tangentiell flödesfiltrering, hartsscreening, kromatografi, proteindenaturering och återveckning, etc.
- Optimering av process vad gäller kvalitet, avkastning, återvinning, kostnad och skalbarhet.
- Validering av nedströms reningsprocessen.
- Riskbaserad parameterintervallsbedömning och Design of Experiments (DoE) i processmodellering.
Service detaljer
Standardiserade protein- eller plasmidreningsplattformar är baserade på flera råa reningssteg och mindre än 4 kromatografisteg, inklusive infångning, mellanliggande rening och polering.
| Service detaljer |
Enhetsverksamhet |
parametrar |
| Rå rening |
centrifugering |
Rotationshastighet, tid |
| Högtryckshomogenisering |
Totalt fast innehåll, tryck, cykler |
| Kontinuerlig alkalisk lysering |
Förhållandet mellan återsuspenderade celler och lyseringslösning, lyseringstid |
| Tangentiell flödesfiltrering |
Membranmaterial och porstorlek, matningsflödeshastighet transmembrantryck (TMP), förhållande mellan filtratvolym och membranarea |
| utfällning |
Typ av utfällning och koncentration, tillsats, pH, temperatur, tid |
| Denaturering och återveckning |
Inklusionskroppsproteinsolubilisering |
Koncentration av denatureringsmedel (t.ex. urea, guanidin-HCl, starkt joniskt tvättmedel), rengöringsmedel (t.ex. natriumdodecylsulfat, SDS), reduktionsmedel (t.ex. ditiotreitol, DTT), kelatbildande medel (etylendiamintetraättiksyra, EDTA), temperatur, tid |
| Proteinåterveckning |
Återveckningsmetoder (spädning, dialys eller SEC-återveckning), proteinkoncentrationer, buffertar, pH, temperatur, tid, oxiderande och reducerande medel (t.ex. glutation, GSH/oxiderat glutation, GSSH, DTT/GSSH, cystein/cystin), småmolekylära tillsatser (L-arginin, urea, guanidin/HCl och tvättmedel) |
| Infångning, mellanrening och polering |
AC (affinitetskromatografi) |
Flera typer av kromatografiharts/kolonn (t.ex. AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), kolumnlängd och diameter, buffertsammansättning, injektionsvolym, mobilfassammansättning (adsorption och desorption), pH, flödeshastighet, bindning, Tvätt- och elueringsförhållanden. |
| IEX (anjon- eller katjonbyteskromatografi) |
| HIC (hydrofobisk interaktionskromatografi) |
| Avsaltnings- och/eller storleksuteslutningskromatografi (SEC) |
| RPC (Reversed Phase Chromatography) |
| MMC, blandad kromatografi |
Fallstudie
fallet 1
Vi får i uppdrag att utveckla och optimera nedströmsreningsprocessen för att öka proteinrenheten från 85 % till 90 % samtidigt som kromatografistegen reduceras.
Yaohai levererade en robust och skalbar reningsprocess med 3 steg av kromatografi för målproteinet, en bakteriell allergi. Och den slutliga renheten nådde 95%.
fallet 2
Yaohai utsågs av vår kund för att optimera endotoxinavlägsnandeprocessen för vaccinet med virusliknande partiklar (VLP).
Vårt team utförde optimering av kromatografiparametrar och beredde en läkemedelssubstans med en renhet på 98 % och en endotoxinrester på 12.8 EU/mg.
Våra erfarenheter
- Vi har varit involverade i utveckling och tillverkning av olika stora molekyler, inklusive rekombinanta subenhetsvacciner, VLP, hormoner (insulin, GLP-1, tillväxthormon), cytokiner (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21 ), tillväxtfaktorer (EGF, FGF, NGF), nanokroppar/endomänantikroppar (sdAbs), enzymer, etc.
Equipment
Vi använder branschledande AKTA Pure, AKTA Avant och Preparative HPLC-system för att utföra olika kromatografimetoder inklusive affinitet, jonbyte, hydrofob interaktion, omvänd fas och storleksuteslutningskromatografi.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEJ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
