Rekombinerade proteiner ser ofta oxideringen av exponerade aminosyresidokedjor, såsom tryptofan (Trp) och metionin (Met), vilket förändrar proteinnas fysikokemiska egenskaper. Dessa förändringar kan i sin tur bidra till att förändra de biologiska funktionerna hos de påverkade proteinerna, som förlust av bindning, minskning av enzymaktivitet, oväntat snabbt borttagning. Protein är viktiga mål för oxidativa reaktioner eftersom de reagerar snabbt med oxidanter och finns i stort antal i celler, extracellulära vävnader och kroppsfluider.
Därför är övervakning av proteinoxidation avgörande för en framgångsrik utveckling av biomedel.
Yaohai Bio-Pharma erbjuder analys tjänster för aminosyroroxidation, vilket låter dig bestämma aminosyroroxidationen genom Vätskechromatografi-Masspektrometri (LC-MS).
Vi har varit inblandade i Proteinstrukturell Karaktärisering av olika stora molekyler, inklusive Recombinant Subunit Vakcin, Nanokroppar/VHHs/Single-domain antibodies (sdAbs), Antibody Fragment, Hormoner/Peptider, Cytokiner, Växtfaktorer (GF), Enzymer, Kollagener etc.
Reglerkraven för Aminosyror Förbränning
Enligt ICH Q6B-riktlinjerna kan oxidiserade former upptäckas och karaktäriseras med kromatografiska, elektroforetiska och/eller andra relevanta analytiska metoder (t.ex., Högpresterande Vätskechromatografi (HPLC), kapillärelektrofores, masspektroskopi, cirkulär dikroism).
Analytiska Metoder
| Analys |
Metoder |
| Aminosyran oxidation |
LC-MS, Reversed-Phase Högpresterande Vätskechromatografi (RP-HPLC) eller Hydrofob Interaktion Chromatografi Högpresterande Vätskechromatografi (HIC-HPLC) och masspektroskopi |
Analytiska Procedure
1. Provförberedelse
2. LC-MS
3. Dataanalys
Tryptofan (Trp)-resterna är särskilt benägna att oxideras på grund av den höga reaktiviteten hos det aromatiska indolen med reaktiva syrearter. Trp-oxidation kräver viss exponering av Trp-resterna som vanligtvis är gömda i det tredimensionella strukturen av proteinet.
Dock, när Trp-resterna oxideras, kan de omvandlas till en mängd produkter med mycket olika egenskaper än den ursprungliga Trp. Den vanligaste vägen för Trp-oxidation inkluderar bildningen av N-formylkinurenin (Massdiff: +32).
En annan vanligt förekommande oxidationsbara aminosyra är methionin. Sulfuratomet i Met-residuet kan acceptera antingen en eller två syratomer, vilket leder till bildning av sulfoxid (Massdiff: +16) eller sulfon (Massdiff: +32), motsvarande. Denna modification är relativt vanlig på grund av Met:s typiskt höga yteexposition.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
