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Purificação de circRNA baseada em HPLC

O RNA circular, ou circRNA, é um tipo específico de RNA que tem um formato diferente. Enquanto o RNA normal tem uma aparência linear reta, o circRNA é em loop. CircRNAs — um tipo cuja estrutura é crucial porque eles geralmente acabam sendo abundantes e participam de muitos processos celulares importantes. Por um lado, eles regulam como nossos genes são expressos, o que pode influenciar tudo, desde os padrões de crescimento do nosso corpo até como respondemos a doenças. Os circRNAs são de grande interesse para os cientistas; uma melhor compreensão deles pode revelar como as doenças se desenvolvem e identificar novas abordagens terapêuticas. Mas há um problema: os circRNAs são muito pequenos e tendem a estar presentes em quantidades muito baixas nas amostras que os cientistas estudam. Isso torna desafiador coletar circRNA suficiente para pesquisa.

Antes que a fundação definitiva fosse estabelecida para coletar circRNA, um método bem estabelecido chamado cromatografia líquida de alta eficiência, ou HPLC, em resumo, foi utilizado. HPLC é uma técnica versátil usada para separar várias moléculas de acordo com suas características físicas e químicas. Ela opera separando moléculas com base no tamanho e na forma. Como os circRNAs são muito pequenos, eles podem ser facilmente perdidos em meio a milhares de outras moléculas em uma amostra. Isso significa que os circRNAs podem ser separados de outros RNAs, proteínas e detritos exógenos que podem ter sido incluídos na amostra usando métodos eficazes, como cromatografia de exclusão de tamanho (SEC), uma técnica de HPLC. É uma separação importante para cientistas que precisam isolar o circRNA para suas pesquisas.

Isolamento de circRNA baseado em HPLC para análise precisa de downstream

Uma vez que o HPLC auxilia na purificação do circRNA, ele deve ser analisado minuciosamente por cientistas para entender suas funções em nós. Os circRNAs surgiram como moléculas importantes envolvidas em múltiplas funções biológicas, tornando uma compreensão completa dos vários tipos e papéis do circRNA crítica para decifrar seu envolvimento em diversas doenças. Os cientistas não sabem a sequência do circRNA purificado e precisarão descobrir as funções desses papéis. Para isso, eles utilizam técnicas como PCR de transcrição reversa (RT-PCR). Com RT-PCR, os cientistas fazem cópias adicionais do circRNA para que possam estudá-lo mais especificamente. Eles são frequentemente informativos, fornecendo informações sobre como essas moléculas funcionam e o que elas fazem em nossas células, analisando as sequências do circRNA.

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