O RNA circular, ou circRNA, é um tipo específico de RNA que tem um formato diferente. Enquanto o RNA normal tem uma aparência linear reta, o circRNA é em loop. CircRNAs — um tipo cuja estrutura é crucial porque eles geralmente acabam sendo abundantes e participam de muitos processos celulares importantes. Por um lado, eles regulam como nossos genes são expressos, o que pode influenciar tudo, desde os padrões de crescimento do nosso corpo até como respondemos a doenças. Os circRNAs são de grande interesse para os cientistas; uma melhor compreensão deles pode revelar como as doenças se desenvolvem e identificar novas abordagens terapêuticas. Mas há um problema: os circRNAs são muito pequenos e tendem a estar presentes em quantidades muito baixas nas amostras que os cientistas estudam. Isso torna desafiador coletar circRNA suficiente para pesquisa.
Antes que a fundação definitiva fosse estabelecida para coletar circRNA, um método bem estabelecido chamado cromatografia líquida de alta eficiência, ou HPLC, em resumo, foi utilizado. HPLC é uma técnica versátil usada para separar várias moléculas de acordo com suas características físicas e químicas. Ela opera separando moléculas com base no tamanho e na forma. Como os circRNAs são muito pequenos, eles podem ser facilmente perdidos em meio a milhares de outras moléculas em uma amostra. Isso significa que os circRNAs podem ser separados de outros RNAs, proteínas e detritos exógenos que podem ter sido incluídos na amostra usando métodos eficazes, como cromatografia de exclusão de tamanho (SEC), uma técnica de HPLC. É uma separação importante para cientistas que precisam isolar o circRNA para suas pesquisas.
Uma vez que o HPLC auxilia na purificação do circRNA, ele deve ser analisado minuciosamente por cientistas para entender suas funções em nós. Os circRNAs surgiram como moléculas importantes envolvidas em múltiplas funções biológicas, tornando uma compreensão completa dos vários tipos e papéis do circRNA crítica para decifrar seu envolvimento em diversas doenças. Os cientistas não sabem a sequência do circRNA purificado e precisarão descobrir as funções desses papéis. Para isso, eles utilizam técnicas como PCR de transcrição reversa (RT-PCR). Com RT-PCR, os cientistas fazem cópias adicionais do circRNA para que possam estudá-lo mais especificamente. Eles são frequentemente informativos, fornecendo informações sobre como essas moléculas funcionam e o que elas fazem em nossas células, analisando as sequências do circRNA.
Os pesquisadores precisam recuperar todo o circRNA que puderem obter. Os circRNAs estão disponíveis apenas em pequenas quantidades em espécimes biológicos, e o HPLC pode ser útil para separar e coletar uma quantidade maior dessas moléculas críticas. Portanto, os pesquisadores têm uma probabilidade maior de obter circRNA suficiente para seus experimentos e gerar descobertas acionáveis. Quanto mais circRNA eles puderem coletar, mais funções e papéis eles poderão aprender sobre saúde e doença.
Métodos para extração de circRNA de materiais biológicos complexos são frequentemente de alto custo (por exemplo, ultrafiltração), tediosos e propensos à contaminação. Retirar o circRNA sem perder nada geralmente requer algum manuseio cuidadoso e várias etapas. É aqui que o HPLC é realmente útil. Os métodos de HPLC podem tornar o processo de extração mais rápido e eficaz. Ao reduzir as etapas na extração, o HPLC também minimiza a perda potencial de amostras valiosas. Este método cuidadoso produz dados mais confiáveis e ajuda a garantir que o circRNA isolado seja o mais puro possível.
CircRNAs são muito difíceis de estudar, e depende de cientistas serem extremamente precisos em sua identificação e medição. Com base nesse fator, o HPLC não é apenas uma etapa fundamental para remover outros contaminantes, mas também garante que apenas moléculas de circRNA possam ser isoladas, melhorando a especificidade e a sensibilidade da detecção de circRNA. Isso resulta em uma amostra mais limpa, o que é importante para a precisão da pesquisa. Ter uma amostra purificada de circRNA ajuda os cientistas a terem mais confiança em seus resultados e a terem menos chances de cometer erros em seus estudos.
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