Integridade do mRNA
O significado da análise de integridade do mRNA
Os mRNAs são reconhecidos pela sua instabilidade inerente e são suscetíveis à fragmentação na presença de fatores externos, particularmente durante a transcrição in vitro (IVT) e processos de purificação, onde as nucleases onipresentes representam um desafio. A avaliação da integridade do mRNA é crucial no desenvolvimento subsequente de medicamentos baseados em mRNA, garantindo a segurança e a disponibilidade do produto.
A Yaohai-BioPharma fornece serviços abrangentes de teste de integridade de mRNA, empregando métodos como eletroforese em gel de agarose (AGE), eletroforese capilar (CEG) e cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC), aderindo a rigorosos padrões de qualidade para pesquisas e ensaios clínicos.
Requisitos regulamentares para integridade do mRNA
De acordo com as considerações regulamentares da OMS, “a integridade da estrutura do mRNA é considerada um atributo de qualidade crítico para a libertação do mRNA. Assim, o controle é necessário para a integridade do mRNA, porcentagem de mRNA intacto, porcentagem de fragmentos de mRNA e assim por diante.”
Método Analítico
Análise |
De Depósito |
Integridade do mRNA |
AGE, Agarosega eletroforese |
CGE,Electroforese capilar |
CGE-LIF, eletroforese em gel capilar com detecção de fluorescência induzida por luz |
Integridade de mRNA por eletroforese em gel de agarose
A eletroforese em gel de agarose é uma técnica amplamente utilizada para avaliar a integridade do RNA total. Isto envolve a execução da amostra de RNA em um gel desnaturante de agarose, corado com brometo de etídio ou SYBR Green. O gel desnaturante, composto por agarose, facilita a separação do RNA com base no tamanho quando é aplicada corrente elétrica. À medida que o RNA carregado negativamente migra em direção à extremidade positiva do gel, fragmentos menores se movem mais rapidamente, resultando em uma classificação de moléculas de RNA baseada no tamanho.
Integridade do mRNA por eletroforese em gel capilar
A eletroforese em gel capilar (CGE) é uma abordagem analítica de alta resolução fundamental para avaliar a integridade das moléculas de RNA por comprimento. Esta avaliação é significativa para garantia de qualidade, compreensão da potência e otimização dos processos de fabricação. Semelhante à eletroforese em gel de agarose, a CGE utiliza uma corrente elétrica para segregar fragmentos de RNA com base em sua carga e tamanho. Na CGE, um capilar é preenchido com uma matriz de gel de separação infundida com um corante fluorescente. O movimento do RNA ao longo do capilar depende do seu tamanho, e a detecção é obtida usando detectores ultravioleta (UV) ou de fluorescência induzida por luz (LIF).
EN
