No processo de preparação do mRNA de transcrição in vitro (IVT), o DNA plasmídico linearizado é necessário como modelo de transcrição para IVT com a ajuda da RNA polimerase T7. DNA plasmídico de alta qualidade é crucial para a transcrição in vitro.
Com base na plataforma de serviço de preparação de plasmídeos maduros, a Yaohai Bio-Pharma pode oferecer um serviço linearizado de preparação de DNA plasmídico de alta pureza e alto padrão para obter uma transcrição IVT eficiente.
Detalhes dos serviços
| Extração | Serviço Opcional | Detalhes de serviços | Período de entrega (dia útil) |
| Preparação de plasmídeo circular | Síntese genética | Síntese genética (terceiros) | 7-10 |
| Amplificação de plasmídeo | Amplificação de plasmídeo | 2 |
| Extração de plasmídeo |
| Preparação de plasmídeo linearizado | Linearização e purificação de plasmídeos | Linearização de plasmídeo | 1 |
| Purificação de DNA de linearização |
| Controle de qualidade do DNA plasmidial | Pureza de concentração | Espectrofotometria ultravioleta (UV) | 1-2 |
| Conformação plasmidial | Eletroforese em gel de agarose (AGE) |
| Eletroforese capilar (CE) - opcional |
| Identificação do plasmídeo | Identificação de enzimas de restrição/IDADE |
Nossos recursos
- Plasmídeo de modelo de corte livre
Seleção flexível de métodos de linearização
Otimização dos métodos de extração e purificação de DNA para atingir altas taxas de recuperação.
- Controle de qualidade rigoroso
Padrões rigorosos de controle de processo, com uma taxa de conformação superhelicoidal de amostras de plasmídeos para pesquisa superior a 80%.
- Processo de plataforma madura
Serviços de preparação de plasmídeos e controle de qualidade de alto padrão e alta eficiência para atender às necessidades experimentais.
Estudo de caso
Tomando como exemplo o produto mRNA_luciferase do catálogo Yaohai Bio-Pharma, a amostra de plasmídeo modelo de transcrição (grau de pesquisa) tem uma proporção super-hélice de mais de 90%, uma taxa de linearização próxima de 100% e uma taxa de transcrição subsequente de até 1:200 ( DNA plasmídico linearizado:mRNA).
A mRNA_luciferase obtida através da preparação de um plasmídeo linearizado como molde é transfectada em células 293T, e a atividade da reação enzima-substrato é avaliada 24 horas após a transfecção.
Um forte sinal óbvio de actividade de luciferase pode ser detectado, isto é, a proteína luciferase é expressa eficientemente, sugerindo que a pureza do modelo de transcrição pode satisfazer totalmente o requisito de preparação de ARNm de alta qualidade.
Ensaio de Razão de Plasmídeo Superenrolado
Validação da expressão de mRNA da luciferase in vitro
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