Ensaios de potência baseados em células
O significado do ensaio de potência do mRNA
Com o rápido desenvolvimento de vacinas e terapêuticas de mRNA, é necessário um painel específico de métodos de análise para testar a potência (definindo a sua actividade biológica), envolvendo a eficiência translacional do mRNA. Estes métodos baseiam-se normalmente na transfecção celular e em ensaios funcionais da proteína alvo.
A Yaohai Bio-Pharma oferece ensaios de potência baseados em células para substâncias medicamentosas de mRNA ou produtos LNP, incluindo transfecção celular (células 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, etc.) e ensaios ELISA ou Western Blotting (WB).
Requisitos regulamentares para ensaios de potência
De acordo com as considerações regulamentares da OMS, “A potência de cada lote da vacina final deve ser determinada utilizando método(s) funcional(is) quantitativo(s) adequado(s). Os potenciais ensaios de potência in vitro podem incluir sistemas de transfecção baseados em células ou ensaios livres de células.” E a USP recomendou um “ensaio baseado em células” para testar a potência do mRNA, ou seja, a expressão da proteína alvo.
Método Analítico
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Análise
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De Depósito
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Ensaios de Potência
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A transfecção baseada em células e a proteína alvo identificam:
Células 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, etc.
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Procedimento
Passo 1. Transfecção baseada em células com mRNA ou mRNA-LNP
As células são cultivadas e transfectadas com mRNA ou mRNA-LNP. Em detalhe, o ARNm é transfectado após ser misturado com um reagente de transfecção, enquanto o ARNm-LNP é transfectado directamente nas células. Após 24-48 horas, clarifique o sobrenadante contendo a proteína expressa por centrifugação.
Passo 2. Ensaios Funcionais da Proteína Alvo
Realize ensaios ELISA ou WB para avaliar a ligação funcional das proteínas alvo.
Estudo de caso
Ensaios de potência baseados em células de amostras de mRNA
A Yaohai-BioPharma desenvolveu um método de ensaio de potência baseado em células para mRNA, envolvendo cultura celular, transfecção celular e ensaios funcionais de proteínas. Transfectamos mRNA de eGFP, mRNA de mCherry, mRNA de luciferase, mRNA de proteína spike em células 293T e detectamos a proteína alvo através de fluorescência, sinal luminescente ou colorido, WB, ELISA.
Ensaios de potência baseados em células de produtos de mRNA da Yaohai Bio-Pharma
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