Comparado com o capeamento enzimático de duas etapas, o método de capeamento cotranscricional de uma etapa pode reduzir significativamente o fluxo do processo. O método é orientado para resultados e envolve a adição de análogos cap à reação de transcrição in vitro (IVT). Os análogos Cap podem ser introduzidos no início da transcrição, e o mRNA com estrutura cap pode ser obtido após a conclusão da transcrição. Os atuais análogos de cap de terceira geração podem evitar o capping reverso e adicionar diretamente a estrutura Cap 1 ao produto de transcrição.
Para considerações de imunogenicidade in vivo do mRNA e eficiência de tradução, o processo IVT frequentemente adota certos tipos de NTPs modificados, e nucleotídeos modificados comuns são pseudouridina (Ψ), N1-metil-pseudouridina (N1Ψ) e 5-metilcitosina (5mC) .
Figura: Diagrama de reação cotranscricional e de limitação de mRNA
Detalhes de serviços
Serviço | Detalhes de serviços | Período de entrega (dia útil) |
Limite co-transcricional | Resposta transcricional in vitro (análogo Clean Cap) | 1-2 |
| Modificações de nucleotídeos (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Remoção de modelo de DNA (DNase I) |
Otimização da condição IVT - opcional | Projeto e otimização de componentes de reação | 3-7 |
Nossos recursos
- Estratégias diversificadas de modificação de nucleotídeos
Múltiplas estratégias opcionais de modificação de nucleotídeos podem melhorar a expressão proteica.
- Sistema de reação otimizado
Obtenha uma alta taxa de transcrição e alta eficiência de limitação.
- Processo de nivelamento estável
Alcançar uma taxa de limite superior a 95%.
- Controle rigoroso de RNase
Evite a degradação do mRNA de forma eficaz, controlando rigorosamente a RNase no ambiente experimental e nos consumíveis.
Estudo de caso
A Yaohai Bio-Pharma construiu uma plataforma madura de processo de capeamento cotranscricional, usando análogos de caps limpos para adicionar diretamente a estrutura Cap1, evitando o capping reverso. Após o pré-tratamento padronizado da amostra e a detecção por eletroforese capilar (CE), a taxa de limite do mRNA da proteína fluorescente verde aprimorada (eGFP) pode atingir mais de 95%.
Eficiência de limite de mRNA eGFP de mais de 95%
O ARNm de eGFP e o ARNm de mCherry preparados por capeamento co-transcricional são transfectados em células 293T, respectivamente, e um forte sinal fluorescente é observado após 48h, sugerindo que o ARNm é eficientemente expresso em células 293T.
Expressão de mRNA eGFP e mRNA mCherry em células 293T
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