Identificação e quantidade da composição lipídica do LNP
O significado da análise da composição lipídica do LNP
Nanopartículas lipídicas (LNPs), compreendendo lipídios catiônicos, colesterol, fosfolipídios e lipídios conjugados com PEG, servem como sistemas de distribuição proeminentes para medicamentos de mRNA. A estabilidade e a fluidez da bicamada dos LNPs dependem das propriedades e do conteúdo dos vários lipídios utilizados no sistema de formulação. A composição dos lipídios é muito importante para a forma como os LNPs administram os medicamentos.
A Yaohai-BioPharma fornece soluções para identificar e quantificar a composição lipídica de mRNA-LNP usando o método de cromatografia líquida de alto desempenho com detecção de aerossol carregado (HPLC-CAD).
Requisitos regulatórios para composição lipídica
De acordo com as considerações regulatórias da OMS, “a composição final da vacina, incluindo os lipídios, deve ser descrita juntamente com a quantidade dos componentes em cada apresentação”.
Método Analítico
Análise |
De Depósito |
Composição Lipídica |
HPLC combinado com Detector de Aerossol Carregado Corona (CAD) |
Procedimento
Passo 1. Preparação de Amostras Lipídicas
A escolha do diluente é de suma importância para a análise de componentes lipídicos em medicamentos mRNA-LNP. O diluente deve dissolver eficazmente cada componente lipídico e interromper quaisquer interações entre lipídios e mRNA encapsulado. Os diluentes potenciais incluem etanol, etanol/dimetilsulfóxido (DMSO), etanol/formamida, etanol/acetato de trietilamina e outros.
Etapa 2. HPLC-CAD
A cromatografia líquida de fase reversa (RP-HPLC) emparelhada com um detector de aerossol carregado (CAD) foi incorporada nos testes de composição lipídica do LNP. Dado que os lipídios não possuem cromóforos e não absorvem a radiação ultravioleta (UV) sem derivatização, a volatilização é normalmente um desafio. O CAD, sendo mais sensível, pode discernir um espectro mais amplo de conteúdo lipídico. Anteriormente, uma cromatografia líquida de ultra-alto desempenho (UHPLC) acoplada a um método de detector de aerossol carregado (CAD) foi formulada e aplicada em análise lipídica para estudos de LNP de RNA interferente pequeno (siRNA).
Passo 3. Análise de dados
A quantidade de cada lipídio na amostra envolveu cálculos derivados da curva padrão multiplicada pelo fator de diluição. Este processo produziu o conteúdo lipídico para cada constituinte da amostra de mRNA-LNP.
Caso de Análise da Composição Lipídica do LNP com HPLC-CAD
Com base no HPLC-CAD, a Yaohai-BioPharma desenvolveu um método robusto para a análise de componentes lipídicos do mRNA-LNP. Este método foi validado para ser linear, repetível, preciso, exato e específico para formulações de LNP, o que poderia apoiar o desenvolvimento de processos, desenvolvimento de formulações, testes de estabilidade e liberação de mRNA-LNP.
Perfil cromatográfico de 4 lipídios pelo método HPLC-CAD da Yaohai-BioPharma
A linearidade do método HPLC-CAD da Yaohai-BioPharma (R2>0.99)
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