A Yaohai Bio-Pharma prepara o circRNA com base no sistema PIE (alinhamento de éxons e íntrons), que depende da função de auto-splicing dos íntrons do tipo I para obter a ciclização do RNA. A estrutura PIE é projetada usando o gene T4 td ou gene precursor de tRNA suspeito, e o arranjo é o seguinte:
O íntron do RNA e o fragmento do éxon de suporte são divididos em duas partes (terminal 5' e terminal 3'), onde a sequência do terminal 5' é transferida para a cauda da sequência alvo, a sequência do terminal 3' é inserida na frente do sequência alvo, e a sequência do gene alvo é inserida no meio.
Sob a catálise do GTP, a estrutura PIE leva à ciclização de outras sequências além dos íntrons. Combinada com uma estratégia razoável de aumento da taxa de ciclização, a Yaohai Bio-Pharma pode alcançar a ciclização de sequências de até 4 kb com uma taxa de ciclização superior a 80%.
Figura 1. Circulação in vitro de circRNA baseada no sistema PIE
Detalhes dos serviços
| Extração | Serviço Opcional | Detalhes de serviços | Período de entrega (dia útil) |
| Projeto e otimização de sequência de circRNA | Projeto e otimização de sequências de codificação | Alinhamento de sequência CDS Otimização de códon CDS | 1 |
| Projeto e otimização de sequências não codificantes | Projeto e otimização de sequências de íntrons e éxons Projeto e otimização de sequência de braço homóloga Projeto e otimização da sequência de espaçadores | 1-2 |
Estratégias comuns para projeto de sequência de mRNA
| Componentes CircRNA | Funções Biológicas | Estratégias de Otimização |
| Sequências de íntrons e éxons de dois terminais | Auto-splicing de íntron catalisado por GTP para ciclização de sequências fora do íntron. | Projetado de acordo com o gene T4 td ou gene precursor de tRNA de óleo de peixe. |
| Codificação | IRES | Local interno de reconhecimento do ribossomo que regula a tradução do circRNA. | Triagem de sequências internas do local de entrada do ribossomo (IRES) de diferentes fontes virais, por exemplo, fontes EMCV, CVB3. |
| CDS | Regiões codificadoras de proteínas, sequências que codificam antígenos, anticorpos ou outras proteínas funcionais. | A otimização de códons aumenta o nível de tradução; certos códons não ideais podem desempenhar um papel no enovelamento de proteínas. |
| Não codificação | Sequências não codificantes | MiRNAs ou proteínas alvo para exercer regulação genética ou proteica. | O direcionamento de sítios de ligação específicos para miRNAs ou proteínas pode repetir as sequências do sítio de ligação. |
Nossos recursos
- Sistema de Ciclização PIE Otimizado Combinação com estratégias de otimização razoáveis para atingir uma taxa de ciclização superior a 80%;
- Equipe de otimização de CDS de última geração Cooperação com equipe profissional de algoritmos de IA para completar a otimização de códons da região CDS;
- O circRNA de processo maduro e perfeito pode ser alcançado com alta eficiência de ciclização, alta estabilidade e alta eficiência de tradução.
Estudo de caso
A Yaohai Bio-Pharma lançou o circRNA da proteína verde fluorescente aprimorada do produto de controle (eGFP), que é baseado no sistema PIE para alcançar a ciclização do RNA.
Usando um reagente de transfecção convencional, o circRNA eGFP é transfectado em células 293T, e o sinal fluorescente eGFP (verde) pode ser detectado após 24h, que será aumentado após 48h.O sinal fluorescente ainda pode ser detectado no 7º dia e no 14º dia após transfecção.
Validação de expressão in vitro de circRNA eGFP
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