O mRNA circular (circRNA) tem sido amplamente utilizado no estudo de funções de genes ou proteínas. Enquanto isso, é popular no desenvolvimento de produtos biológicos profiláticos e terapêuticos, semelhantes ao mRNA.
A Yaohai Bio-Pharma estabeleceu um conjunto de tecnologias de síntese de circRNA para fornecer RNA de alta qualidade, como design e otimização de sequência, transcrição in vitro (IVT), circularização/ciclização, purificação e encapsulamento de nanopartículas lipídicas (LNP). Todos os produtos são lançados sob rigorosos padrões de controle de qualidade (QC).
Comparado com o mRNA linear, o RNA circular (circRNA) é mais estável em estrutura e é um importante ponto quente na pesquisa atual de medicamentos para ácidos nucleicos. Tem uma ampla gama de aplicações em diferentes campos, seja como circRNA codificador ou circRNA não codificante, incluindo vacinas profiláticas para doenças infecciosas, vacinas terapêuticas oncológicas, medicamentos terapêuticos oncológicos, terapia de reposição proteica, medicina regenerativa, terapia celular e genética (CGT) , papel de esponja molecular e aptâmero de RNA.
Extração | Serviço Opcional | Detalhes de serviços | Período de entrega (dia) |
Projeto e otimização de sequência de circRNA | Design e Otimização de Sequências de Codificação | Otimização de códon CDS | 1 |
Projeto e otimização de sequências não codificadas | Sequência de Intron e Exon, Projeto e Otimização de Braço Homólogo e Espaçador | 1-2 | |
Preparação de Plasmídeo Circular | Síntese Genética | Síntese de genes (terceiros) | 7-10 |
Amplificação de Plasmídeo | Amplificação de Plasmídeo | 2 | |
Extração de Plasmídeo | |||
Preparação de Plasmídeo Linearizado | Linearização e purificação de plasmídeos | Linearização Plasmídica | 1 |
Purificação de DNA de linearização | |||
Transcrição e Ciclização In Vitro | Transcrição e Ciclização In Vitro | Transcrição in vitro e reações de ciclização | 1-2 |
Digestão de RNase R | |||
Otimização opcional | Composição da reação, otimização do tempo | 2-5 | |
Purificação de circRNA | Método de Purificação Convencional | Precipitação de cloreto de lítio | 1 |
Purificação de contas magnéticas | 1 | ||
Purificação de circRNA altamente puro | Cromatografia Líquida Preparativa de Alta Eficiência (HPLC) | 1-2 | |
Troca de buffer | Ultrafiltração | 1 | |
Liofilização de circRNA | Preenchimento de amostra | Enchimento | 2-3 |
Liofilização | Pré-congelamento | ||
Secagem Primária (Sublimação) | |||
Secagem Secundária (Dessorção) | |||
Encapsulamento de circRNA-LNP | Encapsulamento LNP | Pré-tratamento de materiais e líquidos | 2 |
Mistura de dispositivos microfluídicos | |||
Troca de buffer | Filtragem de Fluxo Tangencial | 1 | |
esterilizado | Filtração | ||
Controle de Qualidade do DNA Plasmídico | Concentração/pureza | Espectrofotometria Ultravioleta (UV) | 1-2 |
Conformação plasmidial | Eletroforese em Gel de Agarose (AGE) | ||
Eletroforese Capilar (CE)-Opcional | |||
Identificação do plasmídeo | Identificação de enzima de restrição/IDADE | ||
Controle de Qualidade do circRNA | Concentração/pureza | Espectrofotometria Ultravioleta (UV) | - |
Pureza | Eletroforese em Gel de Agarose (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC opcional | 1 | ||
Controle de qualidade de circRNA-LNP | Eficiência de encapsulamento | Método RiboGreen | 1 |
Tamanho da partícula | Dispersão de Luz Dinâmica (DLS) | 1 | |
Índice de Polidispersidade | Dispersão de Luz Dinâmica (DLS) | 1 | |
Potencial Zeta | Dispersão de Luz Dinâmica (DLS) | 1 | |
Ensaio de Potência Baseado em Células | Transfecção Celular | Chapeamento celular, transfecção celular | 4 |
Detecção de proteína alvo | Observação de fluorescência, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Nós transfectamos circRNA de proteína fluorescente verde aprimorada (eGFP circRNA), circRNA mCherry, circRNA luciferase em células 293T e detectamos proteína alvo através de fluorescência, sinal luminescente ou colorido, western blot (WB), ensaio imunoenzimático (ELISA).
Ensaios de potência baseados em células de amostras de circRNA da Yaohai Bio-Pharma