Em relação à produção em massa de mRNA, a transcrição in vitro (TIV) é um método mais eficiente e maduro. A reação IVT adota DNA plasmidial linearizado contendo o promotor T7 como modelo, e o mRNA é sintetizado com nucleosídeo trifosfato (NTPs) como substratos na presença de RNA polimerase de T7.
A modificação de nucleotídeos é um avanço na exploração de mRNA, onde moléculas de mRNA não modificadas são reconhecidas por sensores de RNA intracelular para ativar a imunidade inata. Para considerações de imunogenicidade in vivo do mRNA e eficiência de tradução, o processo IVT geralmente emprega certos tipos de NTPs modificados, e nucleotídeos modificados comuns são pseudouridina (Ψ), N1-metil-pseudouridina (N1Ψ) e 5-metilcitosina (5mC).
Processo de transcrição in vitro de mRNA
Diagrama de reação de transcrição in vitro (IVT)
Detalhes dos serviços
Serviço Opcional | Detalhes de serviços | Período de entrega (dia útil) |
Transcrição in vitro (IVT) | IVT, transcrição in vitro | 1 |
| Modificações de nucleotídeos (Ψ/N1Ψ/5mC, etc.) |
| Remoção de modelo de DNA (DNase I) |
Otimização da condição IVT - opcional | Projeto e otimização de componentes de reação IVT | 2-5 |
Nossos recursos
- Estratégias diversificadas de modificação de nucleotídeos
Melhore a estabilidade do mRNA e a expressão proteica in vivo.
- Design e otimização rigorosos de testes
A preparação de fragmentos de mRNA de até 10kb pode ser alcançada.
Ao otimizar as condições de reação IVT, a taxa de transcrição é de até 1:200.
- Controle rigoroso de RNase
O controle rigoroso da RNase através de um ambiente experimental e consumíveis pode prevenir eficazmente a degradação do mRNA.
Estudo de caso
O atual sistema de reação IVT é aproximadamente otimizado para sistemas sintéticos com comprimento de cerca de 100 nt, e não para mRNAs de comprimento arbitrário. Quanto mais longa a sequência de mRNA, mais difícil é transcrevê-la e mais propensa à degradação.
A fim de preparar sequências de mRNA personalizadas com um comprimento de cerca de 10 kb, a Yaohai Bio-Pharma preparou com sucesso amostras de alta qualidade com uma alta taxa de transcrição de 1:135 e obteve 135 μg de produtos de mRNA inicialmente purificados após 1 μg de plasmídeo linearizado foi transcrito in vitro através de desenho experimental rigoroso, otimização contínua das condições de reação e controle rigoroso da RNase.
Identificação de mRNA (eletroforese em gel de agarose)
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