Integralność mRNA
Znaczenie analizy integralności mRNA
mRNA są rozpoznawane ze względu na swoją wrodzoną niestabilność i są podatne na fragmentację w obecności czynników zewnętrznych, szczególnie podczas transkrypcji in vitro (IVT) i procesów oczyszczania, gdzie wszechobecne nukleazy stanowią wyzwanie. Ocena integralności mRNA ma kluczowe znaczenie w późniejszym opracowywaniu leków na bazie mRNA, zapewniając zarówno bezpieczeństwo, jak i dostępność produktu.
Yaohai-BioPharma świadczy kompleksowe usługi badania integralności mRNA, wykorzystując takie metody, jak elektroforeza w żelu agarozowym (AGE), elektroforeza kapilarna (CEG) i wysokosprawna chromatografia cieczowa (HPLC), przestrzegając rygorystycznych standardów jakości zarówno w badaniach naukowych, jak i klinicznych.
Wymagania regulacyjne dotyczące integralności mRNA
Według ustaleń regulacyjnych WHO „integralność struktury mRNA uważa się za kluczową cechę jakości uwalniania mRNA. Dlatego konieczna jest kontrola integralności mRNA, procentu nienaruszonego mRNA, procentu fragmentów mRNA i tak dalej.
Metoda analityczna
Analiza |
Metody |
Integralność mRNA |
AGE, Agarozagelektroforeza el |
CGE,Elektroforeza kapilarna |
CGE-LIF, Kapilarna elektroforeza żelowa z detekcją fluorescencji indukowanej światłem |
Integralność mRNA metodą elektroforezy w żelu agarozowym
Elektroforeza w żelu agarozowym jest szeroko stosowaną techniką oceny integralności całkowitego RNA. Obejmuje to umieszczenie próbki RNA na denaturującym żelu agarozowym, zabarwionym bromkiem etydyny lub zielenią SYBR. Żel denaturujący składający się z agarozy ułatwia rozdział RNA na podstawie wielkości pod wpływem prądu elektrycznego. Gdy ujemnie naładowany RNA migruje w kierunku dodatniego końca żelu, mniejsze fragmenty poruszają się szybciej, co skutkuje sortowaniem cząsteczek RNA na podstawie wielkości.
Integralność mRNA metodą elektroforezy w żelu kapilarnym
Elektroforeza w żelu kapilarnym (CGE) to metoda analityczna o wysokiej rozdzielczości, kluczowa dla oceny integralności cząsteczek RNA na podstawie długości. Ocena ta ma znaczenie dla zapewnienia jakości, zrozumienia siły działania i optymalizacji procesów produkcyjnych. Podobnie jak elektroforeza w żelu agarozowym, CGE wykorzystuje prąd elektryczny do segregacji fragmentów RNA na podstawie ich ładunku i wielkości. W CGE kapilara jest wypełniona matrycą żelową rozdzielającą nasyconą barwnikiem fluorescencyjnym. Ruch RNA wzdłuż kapilary zależy od jej wielkości, a wykrywanie odbywa się za pomocą detektorów ultrafioletu (UV) lub fluorescencji indukowanej światłem (LIF).
EN
