Identyfikacja i ilość składu lipidów LNP
Znaczenie analizy składu lipidów LNP
Nanocząstki lipidowe (LNP), składające się z lipidów kationowych, cholesterolu, fosfolipidów i lipidów koniugowanych z PEG, służą jako ważne systemy dostarczania produktów leczniczych mRNA. Stabilność i dwuwarstwowa płynność LNP zależą od właściwości i zawartości różnych lipidów stosowanych w układzie formulacji. Skład lipidów jest bardzo ważny dla tego, jak dobrze LNP dostarczają leki.
Yaohai-BioPharma dostarcza rozwiązania do identyfikacji i ilościowego oznaczania składu lipidów mRNA-LNP przy użyciu metody wysokosprawnej chromatografii cieczowej z detekcją aerozolu naładowanego (HPLC-CAD).
Wymagania regulacyjne dotyczące składu lipidów
Zgodnie z ustaleniami regulacyjnymi WHO: „Ostateczny skład szczepionki, w tym lipidy, powinien być opisany wraz z ilością składników w każdej postaci”.
Metoda analityczna
Analiza | Metody |
Skład lipidów | HPLC w połączeniu z detektorem aerozoli ładowanych koronowo (CAD) |
Procedura
Krok 1. Przygotowanie próbki lipidów
Wybór rozcieńczalnika ma ogromne znaczenie w analizie składników lipidowych produktów leczniczych mRNA-LNP. Rozcieńczalnik powinien skutecznie rozpuszczać każdy składnik lipidowy i zakłócać wszelkie interakcje pomiędzy lipidami i kapsułkowanym mRNA. Potencjalne rozcieńczalniki obejmują etanol, etanol/sulfotlenek dimetylu (DMSO), etanol/formamid, etanol/octan trietyloaminy i inne.
Krok 2. HPLC-CAD
Chromatografię cieczową z odwróconymi fazami (RP-HPLC) w połączeniu z detektorem aerozolu naładowanego (CAD) włączono do badania składu lipidów LNP. Biorąc pod uwagę, że lipidom brakuje chromoforów i nie absorbują promieniowania ultrafioletowego (UV) bez derywatyzacji, ulatnianie jest zazwyczaj trudne. CAD, ponieważ jest bardziej czuły, może rozpoznać szersze spektrum zawartości lipidów. Wcześniej opracowano metodę ultrawysokosprawnej chromatografii cieczowej (UHPLC) w połączeniu z detektorem aerozolu naładowanego (CAD) i zastosowano ją w analizie lipidów w badaniach LNP małych interferujących RNA (siRNA).
Krok 3. Analiza danych
Ilość każdego lipidu w próbce obliczono na podstawie krzywej standardowej pomnożonej przez współczynnik rozcieńczenia. W procesie tym uzyskano zawartość lipidów dla każdego składnika w próbce mRNA-LNP.
Przypadek analizy składu lipidów LNP za pomocą HPLC-CAD
W oparciu o HPLC-CAD firma Yaohai-BioPharma opracowała solidną metodę analizy składników lipidowych mRNA-LNP. Potwierdzono, że metoda ta jest liniowa, powtarzalna, precyzyjna, dokładna i specyficzna dla preparatów LNP, co może pomóc w opracowywaniu procesów, opracowywaniu receptur, testowaniu stabilności i uwalnianiu mRNA-LNP.
Profil chromatograficzny 4 lipidów metodą HPLC-CAD firmy Yaohai-BioPharma
Liniowość metody HPLC-CAD firmy Yaohai-BioPharma (R2＞0.99)
EN
