mRNA-integritet
Betydningen av mRNA-integritetsanalyse
mRNA er anerkjent for deres iboende ustabilitet og er mottakelige for fragmentering i nærvær av eksterne faktorer, spesielt under in vitro transkripsjon (IVT) og renseprosesser, der allestedsnærværende nukleaser utgjør en utfordring. Evaluering av mRNA-integritet er avgjørende i den påfølgende utviklingen av mRNA-baserte legemidler, noe som sikrer både sikkerhet og produkttilgjengelighet.
Yaohai-BioPharma tilbyr omfattende mRNA-integritetstestingtjenester, ved å bruke metoder som agarosegelelektroforese (AGE), kapillærelektroforese (CEG) og høyytelses væskekromatografi (HPLC), og overholder strenge kvalitetsstandarder for både forskning og kliniske studier.
Regulatoriske krav for mRNA-integritet
I følge WHOs regulatoriske betraktninger, "anses integriteten til strukturen til mRNA å være en kritisk kvalitetsegenskap for frigjøring av mRNA. Dermed er kontroll nødvendig for mRNA-integritet, prosentandel intakt mRNA, prosentandel mRNA-fragmenter og så videre.»
Analytisk metode
Analyse |
Metoder |
mRNA-integritet |
AGE, Agarosegel elektroforese |
CGE,Kapillær elektroforese |
CGE-LIF, Kapillær gelelektroforese med lysindusert fluorescensdeteksjon |
mRNA-integritet ved agarosegelelektroforese
Agarosegelelektroforese er en mye brukt teknikk for å evaluere integriteten til totalt RNA. Dette innebærer å kjøre RNA-prøven på en denaturerende agarosegel, farget med enten etidiumbromid eller SYBR Green. Den denaturerende gelen, sammensatt av agarose, letter separasjonen av RNA basert på størrelse når en elektrisk strøm påføres. Når negativt ladet RNA migrerer mot den positive enden av gelen, beveger mindre fragmenter seg raskere, noe som resulterer i en størrelsesbasert sortering av RNA-molekyler.
mRNA-integritet ved kapillærgelelektroforese
Kapillær gelelektroforese (CGE) står som en analytisk tilnærming med høy oppløsning som er avgjørende for å måle integriteten til RNA-molekyler etter lengde. Denne vurderingen har betydning for kvalitetssikring, styrkeforståelse og optimalisering av produksjonsprosesser. I likhet med agarosegelelektroforese, bruker CGE en elektrisk strøm for å separere RNA-fragmenter basert på deres ladning og størrelse. I CGE er en kapillær fylt med en separasjonsgelmatrise infundert med et fluorescerende fargestoff. Bevegelsen av RNA langs kapillæren er avhengig av størrelsen, og deteksjon oppnås ved bruk av ultrafiolett (UV) eller lysindusert fluorescens (LIF) detektorer.
EN
