Alle Categorieën
Preparatie van eiwit zonder tag

Preparatie van eiwit zonder tag

Startpagina >  Microbiële CDMO  >  Onderzoek & Ontdekking  >  Preparatie van eiwit zonder tag

Preparatie van eiwit zonder tag

Eiwittags, als fusiepartners gebruikt in recombinante DNA-technologieën, maken efficiënte, eenstaps-affiniteitspurificatie mogelijk voor verschillende eiwitten/peptiden met verschillende kenmerken. Ondanks dit belangrijke voordeel kunnen tags als exogene aminozuren de eiwitstructuur en biologische functies veranderen. Daarom worden tag-vrije (tag-free) eiwitten of peptiden vaker voorgesteld om veiligheid en effectiviteit te waarborgen, vooral in het biofarmaceutische veld. Een recombinant eiwit met een fusietag heeft beperkte mogelijkheden om toestemming te krijgen van medische/farmaceutische instanties.

Op basis van het microbiële biologische R&D-platform biedt Yaohai Bio-Pharma aangepaste diensten voor de bereiding van niet-gemarkeerde (Tag-free) eiwitten, gericht op het voldoen aan unieke doelen voor onderzoek, ontwikkeling en productie voor klinisch gebruik.

Trefwoorden: productie van tag-vrije eiwitten, zuivering van niet-gemarkeerde eiwitten, bereiding van eiwitten op basis van vrije tags, expressie en zuivering van tagloze eiwitten, hoogwaardige tag-vrije doeleiwitten

Toepassing: onderzoek naar menselijke geneesmiddelen, ontwikkeling van diergeneesmiddelen, ontwikkeling van recombinante vaccins, productie van recombinante grote moleculenbiologica

Ons Microbiële R&D-platform

Wij hebben ervaring in microbiële stamverandering, fermentatie en productzuivering.

Bacteriën: Escherichia coli (E. coli)

Gist: Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha)

Aangepaste Opties
Modaliteit Recombinant eiwit
Startmaterialen Gensequenties, recombinant plasmid of geïngeneerde stammen
Leveranties Verfijnen: >80%, >85%, >90% Hoeveelheid: 0,2~10 g (te bepalen door het project)
Expressiesysteem en vorming

E. coli periplasma-secrétie, oplosbare en inclusiebody-expressie;

Intracellulaire of secrétieexpressie in gist

Analysemethoden Ultraviolet (UV), bicinchoninezuurtest (BCA), Bradford of Lowry voor hoeveelheid
Sodium dodecyl-sulfate polyacrylamide gel electrophorese (SDS-PAGE) voor zuiverheidscontrole
Optioneel: Western blot (WB), enzym-gekoppelde immunosorbent assay (ELISA), hoogprestatie vloeistofchromatografie (HPLC)
Restmaten Endotoxine (optioneel)
Service Details

Diensten

Service Details

Minimale tijdslijn (werkdag)

Genesynthese

Codonoptimalisatie voor specifieke expressiehost

7~10 dagen

Genesynthese

Plasmid/vectorconstructie

Klonen in plasmid/vector

2 dagen

Plasmidtransformatie

Polymerase chain reaction (PCR) verificatie, restrictie enzym digestie, gen sequentie ring

3 dagen

Proteïne uitdrukking in E. coli

Plasmid transformatie,

2 dagen

Kweken in schuddenfles

3 dagen

7L-schaal fermentatie, optimalisatie

4 dagen per batch

Tag-vrije proteïnezuivering, optimalisatie

5~10 dagen per batch

Testen door middel van sodium dodecyl-sulfate polyacrylamide gel electrophorese (SDS-PAGE)

Proteïne uitdrukking in gist

Voorbereiding van competent gistcellen

4 dagen

Plasmide linearisatie en elektro-transformatie

7L-schaal fermentatie, optimalisatie

5 dagen

Tag-vrije proteïnezuivering, optimalisatie

7 dagen per batch

Purificatie van eiwit zonder tag

5~10 dagen per batch

Kwaliteitscontrole door SDS-PAGE

Aanvullende diensten (optioneel)
Vraag een gratis offerte aan

Get in touch