Recombinante eiwitten zien vaak de oxidatie van blootgestelde zijketens van aminozuren, zoals tryptofaan (Trp) en methionine (Met), waardoor de fysisch-chemische eigenschappen van eiwitten veranderen. Deze veranderingen kunnen op hun beurt bijdragen aan het veranderen van de biologische functies van de aangetaste eiwitten, zoals verlies van binding, vermindering van enzymatische activiteit en onverwacht snelle klaring. Eiwitten zijn belangrijke doelwitten voor oxidatieve reacties omdat ze snel reageren met oxidanten en overvloedig aanwezig zijn in cellen, extracellulaire weefsels en lichaamsvloeistoffen.
Daarom is het monitoren van eiwitoxidatie van cruciaal belang voor een succesvolle biofarmaceutische ontwikkeling.
Yaohai Bio-Pharma biedt een analyseservice voor aminozuuroxidatie, waarmee u de aminozuuroxidatie kunt bepalen met behulp van vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS).
We zijn betrokken geweest bij de eiwitstructurele karakterisering van verschillende grote moleculen, waaronder recombinante subeenheidvaccins, nanobodies/VHH’s/single-domein antilichamen (sdAbs), antilichaamfragmenten, hormonen/peptiden, cytokinen, groeifactoren (GF), enzymen, collagenen, enz.
Regelgevende vereisten voor aminozuuroxidatie
Volgens de ICH Q6B-richtlijnen kunnen geoxideerde vormen worden gedetecteerd en gekarakteriseerd door middel van chromatografische, elektroforetische en/of andere relevante analytische methoden (bijvoorbeeld hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC), capillaire elektroforese, massaspectroscopie, circulair dichroïsme).
Analytische methodes
| Analyse |
Methoden |
| Aminozuur Oxidatie |
LC-MS, omgekeerde fase hogedrukvloeistofchromatografie (RP-HPLC) of hydrofobe interactiechromatografie, hogedrukvloeistofchromatografie (HIC-HPLC) en massaspectrometrie |
Analytische procedures
1. Monstervoorbereiding
2. LC-MS
3. Gegevensanalyse
Tryptofaan (Trp) residuen zijn vooral gevoelig voor oxidatie vanwege de hoge reactiviteit van het aromatische indool met reactieve zuurstofsoorten. Trp-oxidatie vereist enige blootstelling aan Trp-residuen die normaal gesproken begraven liggen in de driedimensionale structuur van het eiwit.
Wanneer Trp-residuen echter worden geoxideerd, kunnen ze transformeren in een verscheidenheid aan producten met heel andere eigenschappen dan de oorspronkelijke Trp. De meest voorkomende route voor Trp-oxidatie omvat de vorming van N-formylkinurenine (massaverschil: +32).
Een ander vaak geoxideerd aminozuur is methionine. Het zwavelatoom in het Met-residu kan één of twee zuurstofatomen accepteren, wat overeenkomstig leidt tot de vorming van sulfoxide (massaverschil: +16) of sulfon (massaverschil: +32). Deze wijziging komt relatief vaak voor vanwege de doorgaans hoge oppervlakteblootstelling van Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
