Vloeistofchromatografie-Massaspectrometrie (LC-MS) gebaseerde peptide mapping data bieden een grote hoeveelheid informatie over de primaire en hogere structuur van native en recombinante eiwitten, inclusief aminozuursequentie coverage, post-translatie modificaties (PTMs, zoals glycosylatie, oxidatie, deamidatie), disulfidebindingen, etc.
Yaohai Bio-Pharma biedt peptide mapping analyse services voor uw doeleiwit door LC-MS, om uw onderzoek naar eiwitstructuur te versnellen.
Wij zijn betrokken bij de eiwitstructuur karakterisatie van verschillende grote moleculen, waaronder Recombinante Sub-eenheden Vaccins, Nanolichamen/VHHs/Single-domain Antibodies (sdAbs), Antibody Fragmenten, Hormonen/Peptiden, Cytokines, Groeifactoren (GF), Enzymen, Collagens, etc.
Reguliere vereisten voor Peptide Mapping
ICHQ6B richtlijn adviseert: "Selectieve fragmentatie van het product in afzonderlijke peptiden wordt uitgevoerd met behulp van geschikte enzymen of chemicaliën, en de resulterende peptidenfragmenten worden geanalyseerd door HPLC of een andere gepaste analytische procedure. Peptidenfragmenten dienen zo veel mogelijk geïdentificeerd te worden met technieken zoals aminozuurcompositieanalyse, N-terminale sequentieëring of massaspectrometrie (MS). Peptidenkaart van de actieve stof of geneesmiddelenproduct (DP) met een gepast geverifieerde methode is vaak een methode die wordt gebruikt om de gewenste productstructuur te bevestigen voor partijvrijgave."
Analytische methoden
| Analyse |
Methoden |
| Peptidemapping |
Protease digestie en vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS) |
Analytische procedure
1. Reductie en alkylatie
Het doel is om disulfidebruggen te reduceren en het gegenereerde vrije thiol te blokkeren. De reductie van disulfidebruggen helpt bij het openen van de eiwitstructuur, waardoor de proteolytische hydrolyse efficiënter wordt. Deze stap breekt ook de bruggen tussen de ketens in het geval van meerketeneiwitten die disulfidebruggen hebben die de ketens verbinden (bijv. monoclonale antistoffen, mAbs).
2. Hydrolyse van het eiwit met enzymen
Het doel is om het eiwit in peptiden uiteen te laten vallen. We kiezen de enzymen op basis van de theoretische sequentie van het eiwit en de kennis over de theoretische hydrolyse van het eiwit door enzymen. Op deze manier kiezen voor enzymen, zou moeten resulteren in de beste peptidemappinganalyse.
3. Analyse van de gehydrolyseerde peptiden Met behulp van Online Reverse Fase-Hoge Prestatie Vloeistofchromatografie met Ultraviolet (UV) en Elektrospray-Massaspectrometrie Detectie (LC/ES-MS).
Peptiden scheiden op basis van polariteit met LC (reverse fase-LC)
Terwijl het peptiid afstroomt van de LC-kolom, genereert de massaspectrometer massa-informatie samen met fragmention-informatie, wat ons in staat stelt om de sequentie-informatie te bepalen. We gebruiken de sequentie-informatie om de identiteit van het peptiid te bevestigen en primaire informatie te verstrekken.
We kunnen ook de fragmentatie-informatie genereren van de peptiden terwijl ze de massaspectrometerbron binnenkomen vanaf de LC-kolom. Afhankelijk van de eisen van het onderzoek is dit selectief LC-MS/MS of niet-selectief, wat kan worden beschouwd als een vorm van tandem MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
