De bezetting van N-glycosyleringsplaatsen is een fysiologisch kenmerk van glycoproteïnen en produceert voornamelijk N-glycaan. Yaohai Bio-Pharma's N-glycosylatie-locatiebezettingsanalysedienst wordt uitgevoerd door middel van vertering, afgifte, verrijking en analyse met behulp van vloeistofchromatografie-elektrospray-ionisatie-massaspectrometrie-massaspectrometrie (LC-ESI-MS/MS).
We zijn betrokken geweest bij de eiwitstructurele karakterisering van verschillende grote moleculen, waaronder recombinante subeenheidvaccins, nanobodies/VHHs/single-domein antilichamen (sdAbs), antilichaamfragmenten, hormonen/peptiden, cytokinen, groeifactoren (GF), enzymen, collagenen, enz.
Regelgevende vereisten voor bezetting van N-glycosyleringslocaties
Volgens de ICH Q6B-richtlijn wordt “voor glycoproteïnen het koolhydraatgehalte (neutrale suikers, aminosuikers en siaalzuren) bepaald. Bovendien worden de structuur van de koolhydraatketens, het oligosacharidepatroon (antennair profiel) en de glycosyleringsplaats(en) van de polypeptideketen zo goed mogelijk geanalyseerd.”
Analytische methode
| Analyse |
Methoden |
| N-glycosylatieplaatsbezetting |
LC-MS na deglycosylase- en proteasevertering |
procedures
1. Eiwitvertering van eiwitten om kleine peptidefragmenten te genereren.
2. Afgifte van N-glycan met behulp van endoglycosidase H of PNGase F. Endoglycosidase H splitst de binding tussen de twee GlcNAc-residuen in de kern van N-gekoppelde glycanen, terwijl PNGase F een glycoamidase is die de binding tussen GlcNAc en Asn verbreekt, waardoor de gehele binding vrijkomt. suikerketen en het omzetten van Asn in Asp met een massatoename van 1-Da.
3. N-glycopeptideverrijking via HILIC (Hydrofiele interactie vloeistofchromatografie)
4. Analyse van de bezetting van N-gekoppelde glycosyleringsplaatsen met behulp van LC-ESI-MS/MS.
NL
EN
AR
HR
CS
DA
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
