ייעול תהליך הטיהור עבור אינסולין אנושי רקומביננטי

בשנים האחרונות, צמיחת חולי סוכרת הניעה את הביקוש לאינסולין, אך יש מחסור באינסולין במחיר סביר. ייצור אינסולין יעיל וחסכוני הוא חיוני. מיוצר בעיקר באמצעות Escherichia coli (E. coli) ושמרים בשל צמיחה מהירה ועלות נמוכה, E. coli עומד בפני עיבוד מורכב במורד הזרם.

סקירה כללית של עיבוד במורד:

טיהור אינסולין אנושי רקומביננטי מגופי הכללת E. coli כרוך במספר שלבים, כולל התאוששות, כביסה, ממיסות וחמצון, ביקוע, חילופי חיץ, טיהור כרומטוגרפי, משקעים, רנטורציה, ביקוע אנזימטי וניסוח.

Yaohai Bio-Pharma מתגאה בניסיון רב בייצור וטיהור אינסולין רקומביננטי, יחד עם צוות מומחים, המבטיחים שייצור האינסולין שלך יושלם ביעילות גבוהה. מינוף הניסיון שלנו ממאות פרויקטים, יאוהאי מסכם בחביבות כיצד לייעל את תהליך הטיהור במורד הזרם עבור אינסולין אנושי רקומביננטי.

הכללת שיקום ושטיפה של הגוף:

תאים מופרעים באמצעות שיטות מכניות (כגון אולטרסאונד, הומוגניזציה בלחץ גבוה) או טיפול בליזוזים, ולאחר מכן כביסה מאגרים (המכילים אוריאה, Triton X-100 וכו ') כדי להסיר זיהומים. במהלך הכביסה, יש לבצע אופטימיזציה של פרמטרים כדי להבטיח איכות חלבון תוך שליטה בעלויות.

מיסוס וחמצון גוף הכללה:

דנטורנטים בריכוז גבוה (כגון גואנידין הידרוכלוריד ואוריאה) משמשים להמסת גופי הכללה, בתוספת דיתיוטריטול או β-מרקפטואתנול כדי למנוע היווצרות של קשרי דיסולפיד שגויים. pH וטמפרטורה משפיעים באופן משמעותי על תגובות ההמסה והחמצון.

מחשוף והחלפת מאגר:

פיצול ציאנוגן ברומיד משמש להסרת חומצת האמינו ההתחלתית ה-N-טרמינלית, אך הוא מציב רעילות ובעיות ספציפיות נמוכה. באמצעות דיאליזה, סינון אולטרה או כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל, החלפת Buffer מסירה ריאגנטים מזיקים כהכנה לפעולות הבאות.

טיהור ומשקעים כרומטוגרפיים:

טכניקות כרומטוגרפיות מרובות משמשות לטיהור אינסולין, כולל כרומטוגרפיה זיקה, כרומטוגרפיה של חילופי יונים, כרומטוגרפיה הפוכה, כרומטוגרפיה של אינטראקציות הידרופוביות וכרומטוגרפיה של אי הכללת גודל. שיטות משקעים, כגון משקעי pH והתגבשות אבץ, משמשות להסרת זיהומים וריכוז חלבונים.

חידוש טבעי:

החלבון הממוסס מדולל במאגר רנטורציה כדי לקדם יצירה נכונה של קשרי דיסולפיד וקיפול חלבון. כרומטוגרפיה נוזלית מתקפלת חלבון ודיאליזה הן גם שיטות המשמשות לרנטורציה.

מחשוף וניסוח אנזימטי:

טריפסין ו-carboxypeptidase B משמשים לפיתוח ה-C-פפטיד, ויוצרים את ההטרודימר הפעיל של האינסולין. לבסוף, התגבשות וליאופיליזציה משמשות להסרת שאריות מלחים ומאגרים, הכנת ניסוח יציב. תוספים ספציפיים (כגון אבץ ופרוטמין) מתווספים כדי לענות על צרכים קליניים שונים.

סיכום:

עיבוד במורד הזרם של אינסולין מ החיידק הוא מורכב. התמקדות עתידית צריכה להיות באופטימיזציה של שלבים אלה לייצור יעיל וחסכוני כדי לענות על הביקוש ולהפחית עלויות.

Yaohai Bio-Pharma גם מחפשת באופן פעיל שותפים גלובליים מוסדיים או בודדים ומציעה את התמורה התחרותית ביותר בתעשייה. אם יש לך שאלות, אנא אל תהסס לפנות אלינו: [email protected]