תהליך ייצור של eGFP mRNA

הייצור של mRNA eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) כולל סדרה של טכניקות ביולוגיה מולקולרית ליצירת מולקולת RNA פונקציונלית המקודדת לביטוי ה-eGFP. בתחום ה-eGFP mRNA, צברה יאוהאי ביו-פארמה ניסיון רב במתן מענה לצרכים הספציפיים של לקוחות. תוך מינוף הניסיון שלנו, סינתזנו את זרימת התהליך לייצור mRNA של EGFP.

1. שיבוט הגן eGFP: זה כדי להשיג את רצף הגנים המקודד ל-eGFP. גן זה משובט בדרך כלל מווקטור פלסמיד קיים או מסונתז באופן מלאכותי על סמך רצף הנוקלאוטידים הידוע. לאחר מכן הגן המשובט מאומת באמצעות רצף כדי להבטיח דיוק.
2. אופטימיזציה של גנים לביטוי: לביטוי אופטימלי במערכת היעד (למשל, תאי יונקים, חיידקים או מערכות שעתוק במבחנה), הגן eGFP עשוי לעבור אופטימיזציה של קודונים. זה כרוך בהחלפת קודונים נדירים ברצף המקורי בקודונים בשימוש תכוף יותר באורגניזם המארח, מה שמגדיל את הסיכויים לתרגום יעיל.
3. במבחנה הכנת תבנית תמלול: ברגע שהגן שעבר אופטימיזציה מוכן, הוא משולב בוקטור מתאים, לרוב פלסמיד, המכיל אלמנטים מווסתים הדרושים לתעתוק (למשל, רצף פרומטור). פלסמיד זה משמש כתבנית לתעתוק במבחנה.
4. במבחנה תַעֲתוּק: באמצעות תבנית הפלסמיד המוכנה, מתבצעת שעתוק חוץ גופית כדי לסנתז eGFP mRNA. תהליך זה כולל שימוש באנזימי RNA פולימראז, המזהים את רצף הפרומטור ומתחילים שעתוק, ומייצרים גדיל RNA משלים לתבנית ה-DNA. בהתאם ליישום הרצוי, ה-mRNA עשוי להיות מכוסה, polyadenylated ו / או שונה כדי לשפר את היציבות ויעילות התרגום.
5. טיהור ובקרת איכות: ה-mRNA ה-eGFP המסונתז מטוהר לאחר מכן כדי להסיר כל מזהמים, כולל DNA, חלבונים ונוקלאוטידים חופשיים. שיטות טיהור יכולות לכלול אלקטרופורזה בג'ל, כרומטוגרפיה של עמודות או הפרדה על בסיס חרוזים. לאחר הטיהור, ה-mRNA מנותח לאיכות, כולל ריכוז, טוהר ושלמות, תוך שימוש בטכניקות כמו ספקטרופוטומטריית UV-Vis ואלקטרופורזה ג'ל.
6. אחסון ומשלוח: ה-mRNA המטוהר של eGFP מאוחסן בדרך כלל בטמפרטורות נמוכות כדי לשמור על יציבות. לשימוש ניסיוני, ה-mRNA יכול להיות מועבר לתאים בשיטות שונות, כולל אלקטרופורציה, lipofection או וקטורים ויראליים, בהתאם ליישום הספציפי ולסוג תא היעד.
7. ביטוי ואימות: ברגע שנכנס לתא, ה-mRNA eGFP מתורגם לחלבון הפלורסנט הירוק המוגבר, אותו ניתן לדמיין באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. זה מאפשר אימות של ייצור, מסירה וביטוי מוצלחים של mRNA.

לסיכום, ייצור ה-mRNA של eGFP כולל שיבוט הגן, אופטימיזציה שלו לביטוי, הכנת תבנית שעתוק חוץ גופית, ביצוע תגובת השעתוק, טיהור ה-mRNA שנוצר, ולבסוף מסירתו לתאים לצורך ביטוי ואימות.

אנחנו גם מחפשים באופן פעיל שותפים גלובליים מוסדיים או בודדים. אנו מציעים את הפיצוי התחרותי ביותר בענף. אם יש לך שאלות, אנא אל תהסס לפנות אלינו: [email protected]