Otkrivanje tajni visokokvalitetnog izvlačenja plazmida

Izdvajanje plazmida je ključno za istraživače. Kao genetski vektori, plazmidi su neophodni u istraživanju cjepiva i genetskoj terapiji, gdje se kvaliteta pretpostavlja. Ključni faktori kvalitete uključuju proporciju superuvijenog oblika i sadržaj endotoksinova. Propisi se razlikuju: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, s <5% linearnog/otvoreno-kružnog DNA. Klijenti često preferiraju ≥95% superuvijenog oblika. Nivoi endotoksina su: za istraživanje (>50 EU/µg), transfekcija (<50 EU/µg) i bez endotoksina (<0.1 EU/µg).

Superuvijeni plazmidni DNA

Plazmidi iz Escherichia coli uključuju superuvijeni (SC), otvoreno-kružni (OC) i linearni (L) DNA. Visoka proporcija SC oblika povećava učinkovitost transfekcije i izraz. Na primjer, transfekcija plazmida sa 85.45% SC je 2.5 puta veća, a izraz HGF-a za plazmid sa 93.28% SC je 1.8 puta veći, što potvrđuje prednost SC DNA.

Otvoreno-kružni DNA: Kada se jedan lanc dvostruke DNA prekine, superzavojna struktura postaje šibka, oblikujući otvoreno-kružni plazmid s većim volumenom koji se najsporije migrira tijekom elektroforeze i nalazi se na vrhu.

Linearni DNA: Kada se oba lanca plazmidnog DNA prekine, obrazuje se linearna struktura s relativno manjim volumenom koja se brže migrira od otvoreno-kružnog DNA, ali sporiše nego superzavojni DNA, nalazi se na drugom mjestu.

Superzavojni DNA: Dva heliksa se prepločuju, twisteći se u superzavojnu strukturu temeljenu na DNA heliksu. Također ima najmanji volumen i najbrže se migrira tijekom elektroforeze, nalazi se na dnu.

Kvantitativna analiza proporcije superzavojnog DNA

Laboratoriji koriste agaroznu gel elektroforezu (AGE) i Gel-Pro Analyzer za procjenu proporcije superzavojnog DNA putem slika iz elektroforeze. Jedna slika prikazuje 97,539% SC DNA, dok druga prikazuje 63,833% SC i 36,167% OC DNA (linearni DNA nije vidljiv).

Tajna endotoksinova u plazmima

Endotoksin je komponenta vanjske slojeva stjenke Gram-negativnih bakterija, oslobađena nakon bakterijskog smrti ili lizisa, koja sadrži toksičan lipopolisacharid A. Tijekom izlučivanja plazmida, endotoksin ulazi u lizatnu rješenju, što utječe na učinkovitost transfekcije i izaziva nespecifične imunološke odgovore, što može dovesti do lažno pozitivnih rezultata u eksperimentima.

Kvantitativna i kvalitativna analiza endotoksina

Test Limulus amebocyt lysate (LAL) otkriva endotoksin putem aglutinacije s 2-keto-3-deoksioktonovom kiselino (KDO) u lipopolisacharidu (LPS). To je kvalitativni i polukvantitativni test koji pokazuje prisutnost endotoksina preko zguštanja ili promjene boje kada se meša s uzorcima.

Yaohai Bio-Pharma pruža superuvite plazmide bez endotoksina. Izvornikovanje Yaohai povećava učinkovitost transfekcije i ekspresije. Dostavljani plazmidi imaju proporciju ≥95% SC (prosječno 85%±10%) i razinu endotoksina ≤0,1, ≤0,01 ili ≤0,005 EU/μg.

Također aktivno tražimo globalne partnerе iz institucija ili pojedince. Ponuditi ćemo najbolju kompenzaciju u industriji. Ako imate bilo kakva pitanja, slobodno nas kontaktirajte: [email protected]