Proizvodnja Recombinantnih Proteina: Inženirane Štame E. coli

Escherichia coli (E. coli) je igrala značajno vlogo pri proizvodnji rekombinantnih белjakovin v biotehnički farmacevtski industriji, služeći kot prvi izrazni vektor za proizvodnjo biološkega zdravila. E. coli se glasi po hitrem rastu, ugodni genetski manipulaciji in hitri sintezi rekombinantnih beljakovin, med drugim prednosti. Obsežne spremembe so bile vzrok, da je E. coli postal optimalen izbor za izraz beljakovin, kar je pripeljalo do oblikovanja različnih inženirskih štrik E. coli.

Yaohai Bio-Pharma se osredotoča na ponujanje enosmernih izvornih storitev za fermentacijo, očiscenje, razvoj formulacije procesa in proizvodnjo vrste biotehničkih farmacevtskih sredstev z uporabo sistemov izražanja E. coli. V zvezi z obsežnim izkušnjama Yaohai smo povzeli, da se četiri običajne štrike E. coli uporabljajo za proizvodnjo rekombinantnih beljakovin in njihove lastnosti.

BL 21 štrika

Izveden iz linije E. coli B, štrajn BL21 nedostaje Lon proteaza i vanjska membrana proteaza OmpT. Lon proteaza uglavnom razlagati eksogenne proteine, dok OmpT uglavnom razlagati proteine ekstracelularne matrice. Nedostatak ovih dvaju ključnih proteaza može učinkovito sprečiti razlaganje rekombinantnih proteina.

Štrajn Origami

Štrajn Origami, derivat E. coli K-12, ima mutacije u tior edukso reduktazi i glutatono reduktazi, što olakšava formiranje točno savijanih proteina koji sadrže disulfidne veze i poboljšava rastvorivost proteina. Štrajn Origami, uključujući Origami, Origami 2 i Origami B, prikladan je za izraz aktivnih proteina koji sadrže disulfidne veze.

Štrajn SHuffle

SHuffle štednjak konstitutivno izražava izomerazu disulfidnih veza DsbC u citoplazmi, što promiče formiranje točnih disulfidnih veza u oksidiranim proteinima. Također služi kao molekularni čaperon za zlaganje proteina, pomagajući u stvaranju točne konformacije.

Rosetta štednjak

Rosetta štednjak dopunjava E. coli s tRNK-ima koji odgovaraju rijetkim kodonima, s ciljem poboljšanja razina izražavanja vanjskih gena, posebno eukariotskih gena, u prokariotskim sustavima. Potiče se od BL21 i nosi plazmid pRARE koji je otporan kloramfenikolu, a dopunjava šest tRNK-a koji odgovaraju rijetkim kodonima (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC i GGA) koje inicijalno nema u E. coli, pružajući "univerzalniju" ekspresiju proteina.

Zaključak

Tri glavna čimbenika za uspješnu proizvodnju rekombinantnih proteina su domaćin, vektor i uvjeti kulture. Na temelju razumijevanja fiziko-kemijskih svojstava rekombinantnog proteina, jedinstvenih prednosti svakog štrajna te specifičnih potreba eksperimenta treba odabrati najpogodniji domaćin. Također, treba optimizirati čimbenike poput plazmidnih vektora, temperature i induktora kako bi se povećala izražavanja proteina.

Yaohai Bio-Pharma također aktivno traži globalne partnerе, institucionalne ili pojedinačne, i nudi najkonkurentniju kompenzaciju u industriji. Ako imate bilo kakva pitanja, slobodno nas kontaktirajte: [email protected]