Proizvodnja rekombinantnih proteina: konstruirani sojevi E. coli Hrvatska

Escherichia coli (E. coli) odigrala je značajnu ulogu u proizvodnji rekombinantnih proteina u biofarmaceutskoj industriji, služeći kao prvi ekspresijski vektor za proizvodnju bioloških lijekova. E. coli, među ostalim prednostima, može se pohvaliti brzim rastom, pogodnom genetskom manipulacijom i brzom sintezom rekombinantnih proteina. Opsežne modifikacije učinile su E. coli optimalnim izborom za ekspresiju proteina, što je dovelo do dizajna različitih konstruiranih sojeva E. coli.

Yaohai Bio-Pharma specijalizirana je za pružanje usluga outsourcinga na jednom mjestu za fermentaciju, pročišćavanje, razvoj procesa formulacije i proizvodnju niza biofarmaceutika korištenjem sustava ekspresije E. coli. S obzirom na opsežno iskustvo tvrtke Yaohai, rezimirali smo da se četiri uobičajena soja E. coli koriste za proizvodnju rekombinantnih proteina i njihove značajke.

BL 21 soj

Izveden iz loze E. coli B, soj BL21 nema Lon proteazu i proteazu vanjske membrane OmpT. Lon proteaza prvenstveno razgrađuje egzogene proteine, dok OmpT uglavnom razgrađuje proteine ​​izvanstaničnog matriksa. Odsutnost ove dvije ključne proteaze može učinkovito spriječiti razgradnju rekombinantnih proteina.

Origami soj

Origami soj, derivat E. coli K-12, ima mutacije u tioredoksin reduktazi i glutation reduktazi, koje olakšavaju stvaranje pravilno savijenih proteina koji sadrže disulfidne veze i povećavaju topljivost proteina. Origami soj, uključujući Origami, Origami 2 i Origami B, pogodan je za ekspresiju aktivnih proteina koji sadrže disulfidne veze.

Shuffle procijediti

Soj SHuffle konstitutivno izražava izomerazu disulfidne veze DsbC u citoplazmi, potičući stvaranje točnih disulfidnih veza u oksidiranim proteinima. Također služi kao molekularni pratilac za savijanje proteina, pomažući u formiranju ispravne konformacije.

Rosetta soj

Soj Rosetta nadopunjuje E. coli s tRNA koje odgovaraju rijetkim kodonima, s ciljem poboljšanja razine ekspresije egzogenih gena, posebno eukariotskih gena, u prokariotskim sustavima. Izveden iz BL21 i nosi pRARE plazmid otporan na kloramfenikol, nadopunjuje šest tRNA koje odgovaraju rijetkim kodonima (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC i GGA) izvorno odsutnim u E. coli, osiguravajući "univerzalniju" ekspresiju proteina.

Zaključak

Tri glavna čimbenika za uspješnu proizvodnju rekombinantnih proteina su uvjeti domaćina, vektora i kulture. Na temelju razumijevanja fizikalno-kemijskih svojstava rekombinantnog proteina, jedinstvenih prednosti svakog soja i specifičnih potreba eksperimenta, treba odabrati najprikladnijeg domaćina. Dodatno, čimbenike kao što su plazmidni vektori, temperatura i induktori treba optimizirati kako bi se poboljšala ekspresija proteina.

Yaohai Bio-Pharma također aktivno traži institucionalne ili pojedinačne globalne partnere i nudi najkonkurentniju naknadu u industriji. Ukoliko imate pitanja, slobodno nas kontaktirajte: [email protected]