Proces proizvodnje eGFP mRNA

Proizvodnja mRNA eGFP (poboljšanog zelenog fluorescentnog proteina) uključuje niz tehnika molekularne biologije za generiranje funkcionalne molekule RNA koja kodira za ekspresiju eGFP. U području eGFP mRNA, Yaohai Bio-Pharma je skupila veliko iskustvo u pružanju usluga specifičnim potrebama klijenata. Koristeći naše iskustvo, sintetizirali smo tijek procesa za proizvodnju EGFP mRNA.

1. Kloniranje eGFP gena: Za dobivanje sekvence gena koja kodira eGFP. Ovaj se gen obično klonira iz već postojećeg plazmidnog vektora ili sintetizira umjetno na temelju poznatog nukleotidnog slijeda. Klonirani gen se potom provjerava sekvenciranjem kako bi se osigurala točnost.
2. Optimizacija gena za ekspresiju: Za optimalnu ekspresiju u ciljnom sustavu (npr. stanice sisavaca, bakterije ili in vitro sustavi transkripcije), eGFP gen može biti podvrgnut optimizaciji kodona. To uključuje zamjenu rijetkih kodona u izvornoj sekvenci s onima koji se češće koriste u organizmu domaćina, povećavajući šanse za učinkovito prevođenje.
3. In vitro Priprema predloška za transkripciju: Jednom kad je optimizirani gen spreman, ugrađuje se u odgovarajući vektor, često plazmid, koji sadrži regulatorne elemente potrebne za transkripciju (npr. promotorsku sekvencu). Ovaj plazmid služi kao obrazac za in vitro transkripciju.
4. In vitro Transkripcija: Korištenjem pripremljenog plazmidnog uzorka, in vitro transkripcija se izvodi da bi se sintetizirala eGFP mRNA. Ovaj proces uključuje upotrebu enzima RNA polimeraze, koji prepoznaju sekvencu promotora i započinju transkripciju, proizvodeći lanac RNA komplementaran DNA šabloni. Ovisno o željenoj primjeni, mRNA se može zatvoriti, poliadenilirati i/ili modificirati kako bi se poboljšala stabilnost i učinkovitost translacije.
5. Pročišćavanje i kontrola kvalitete: Sintetizirana eGFP mRNA se zatim pročišćava kako bi se uklonili svi kontaminanti, uključujući DNK, proteine ​​i slobodne nukleotide. Metode pročišćavanja mogu uključivati ​​elektroforezu u gelu, kromatografiju na stupcu ili odvajanje na temelju kuglica. Nakon pročišćavanja, mRNA se analizira na kvalitetu, uključujući koncentraciju, čistoću i cjelovitost, koristeći tehnike kao što su UV-Vis spektrofotometrija i gel elektroforeza.
6. Skladištenje i dostava: Pročišćena eGFP mRNA obično se pohranjuje na niskim temperaturama kako bi se održala stabilnost. Za eksperimentalnu upotrebu, mRNA se može dostaviti u stanice različitim metodama, uključujući elektroporaciju, lipofekciju ili virusne vektore, ovisno o specifičnoj primjeni i tipu ciljne stanice.
7. Izražavanje i provjera: Jednom u stanici, eGFP mRNA se prevodi u poboljšani zeleni fluorescentni protein, koji se može vizualizirati pomoću fluorescentne mikroskopije. To omogućuje provjeru uspješne proizvodnje, dostave i ekspresije mRNA.

Ukratko, proizvodnja eGFP mRNA uključuje kloniranje gena, njegovu optimizaciju za ekspresiju, pripremu in vitro transkripcijskog predloška, ​​izvođenje transkripcijske reakcije, pročišćavanje dobivene mRNA i konačno isporuku u stanice za ekspresiju i verifikaciju.

Također aktivno tražimo institucionalne ili pojedinačne globalne partnere. Nudimo najkonkurentnije naknade u industriji. Ukoliko imate pitanja, slobodno nas kontaktirajte: [email protected]