Proces proizvodnje mRNA eGFP

Proizvodnja eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA uključuje seriju molekularno-bioloških tehnika za stvaranje funkcionalne RNA molekule koja kodira izražavanje eGFP. U području eGFP mRNA, Yaohai Bio-Pharma je nagomilala obsežne iskustva u zadovoljavanju specifičnih potreba klijenata. Koristeći naše iskustvo, sintetizirali smo procesnu tijeku za proizvodnju EGFP mRNA.

1. Kloniranje eGFP gene : Potrebno je dobiti genomski niz koji kodira za eGFP. Ta se gen tipično klonira s postojećeg plazmidnog vektora ili sintetički stvara na temelju poznatog nukleotidskog niza. Klonirani gen zatim potvrđuje putem sekveniranja kako bi se osigurala točnost.
2. Optimizacija gene za izražavanje : Za optimalno izražavanje u ciljnom sustavu (npr. mačinske ćelije, bakterije ili in vitro transkripcione sustave), eGFP gene može subirati kodonska optimizacija. To uključuje zamjenu rijetkih kodona u izvornom nizu s češće korištenim u domaćem organizmu, povećavajući šanse za učinkovitu translaciju.
3. U vitro Priprema šablona za transkripciju : Kada je optimizirani gen spreman, umetnut će se u odgovarajući vektor, često plazmid, koji sadrži regulatorne elemente potrebne za transkripciju (npr. promotorski niz). Taj plazmid služi kao šablon za in vitro transkripciju.
4. U vitro Transkripcija : Koristeći pripremljeni plazmidni šablon, in vitro transkripcija se izvodi kako bi se sintetizirao eGFP mRNA. Taj proces uključuje upotrebu enzima RNA polimeraze, koje prepoznaju promotor niz i pokreću transkripciju, proizvodeći komplementarni RNA lanac šablonskom DNA nizu. Ovisno o željenom primjenu, mRNA može biti obilježena kapom, poliadenilirana i/ili modificirana kako bi se poboljšala stabilnost i učinkovitost prijevođenja.
5. Čišćenje i kontrola kvalitete : Sintetizirani eGFP mRNA zatim se čisti kako bi se uklonile sve smađe, uključujući DNA, proteine i slobodne nukleotide. Metode čišćenja mogu uključivati gel elektroforezu, stupčastu hromatografiju ili odvojivanje na temelju čestica. Nakon čišćenja, mRNA se analizira po kvalitetu, uključujući koncentraciju, čistoću i integritet, koristeći tehnike poput UV-Vis spektrofotometrije i gel elektroforeze.
6. Skladistanje i dostava : Očišćeni eGFP mRNA obično se čuva pri niskim temperaturama kako bi se održala stabilnost. Za eksperimentalnu uporabu, mRNA se može dostaviti u stanice različitim metodama, uključujući elektroporaciju, lipefekciju ili virusne vektore, ovisno o specifičnoj primjeni i vrsti ciljnih stanica.
7. Izražavanje i potvrda : Nakon što se ustanu unutra, eGFP mRNA se prevede u pojačani zelene fluorescentne proteine, koje se mogu vidjeti pomoću fluorescentske mikroskopije. To omogućuje potvrdu uspješnog izrade, dostave i izražavanja mRNA.

U sažetku, proizvodnja eGFP mRNA uključuje kloniranje gene, optimiziranje ga za izražavanje, pripremu šablona za in vitro transkripciju, izvršavanje transkripcijske reakcije, očišćavanje rezultirajuće mRNA i konačno njenu dostavu u stanice za izražavanje i potvrdu.

Također aktivno tražimo globalne partnerе iz institucija ili pojedince. Ponuditi ćemo najbolju kompenzaciju u industriji. Ako imate bilo kakva pitanja, slobodno nas kontaktirajte: [email protected]