Inovativne tehnike sastavljanja za velkoskalo snivanje gena

Tehnologija sastavljanja za sintezu velikih fragmenata DNK od nule temelj je genetske sinteze, koja obuhvaća metode kao što su BioBrickTM, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson assembly, CPEC i Overlap PCR. Zbog ograničenja trenutne tehnologije u točnoj sintezi DNK dužine gena u jednom koraku, potrebno je kombinirati in vitro i in vivo tehnike sastavljanja kako bi se sastavili fragmenti oligonukleotida sintetizirani u segmentima u duge fragmente DNK.

Tehnike in vitro sastavljanja

Klasificiraju se u različite metode na temelju veličine fragmenata i karakteristika niza, s zajedničkim zahtjevom za korištenjem alat enzima. Overlap PCR, koji je temeljen na metodi DNA polimeraze, jednostavan je i brz u izvođenju. BioBrick i BglBrick metode, koje ovisne o isoschizomerima, omogućuju standardizirano sastavljanje, iako je BioBrick metoda neprimjerna za fuzijske proteine. Golden Gate klonačna metoda, temeljena na tip IIS restrikcijskih enzima, omogućuje učinkovitu bezzazornu ligaciju više fragmenata. Gibsonov metod sastavljanja, koji koristi kombinaciju više alat enzima, omogućuje bezzazornu ligaciju s veličinom fragmenata koja može dostići nekoliko stotina kb. Standardizirani dizajn DNS komponenti poboljšava stopu korištenja postojećih fragmenata.

Tehnike in vivo sastavljanja

Iako u vitro sastavljeni fragmenti mogu imati veličinu od nekoliko stotina kb, često je dobivanje nedovoljno, što zahtijeva umnožavanje pomoću organizama poput Escherichia coli. U sastavljanju fragmenata dužinom preko 20 kb, često se koriste rekombinantni sustavi unutar organizama, uključujući Bacillus subtilis, kvasac i inženirane bakterije. Kvasac, kao često upotrijebljeni domaćin, već godinama je poznat po svojoj učinkovitoj sposobnosti homološnog rekombiniranja. Može se koristiti za sastavljanje umjetnih hromozoma duljine do nekoliko megabaza (Mb). Pored toga, Saccharomyces cerevisiae izražava izvanrednu toleranciju prema duljini hromozoma, što pruža teoretsku osnovu za korištenje kvasca pri izgradnji ultra-dugih hromozoma u višim organizmima.

Prijave

Yaohai Bio-Pharma uglavnom koristi dva načina montaže za sintezu gena: montažu ligazom i montažu DNA polimerazom. Metoda ligazne montaže spaja preklapajuće i hibridizirane 5'-fosforilirane oligonukleotidne fragmente u dvostruki lanac DNA pomoću DNA ligaze. Metoda polimerazne montaže koristi DNA polimerazu za produžavanje preklapajućih oligonukleotidnih fragmenata putem hibridizacije, dobivljajući mešavinu različitih duljina, i konačno pojačavajući uspješno sastavljene cjelovite fragmente pomoću primera. Yaohai može pomognuti klijentima zadovoljiti specifične zahtjeve u sintezi gena.

Također aktivno tražimo globalne partnerе iz institucija ili pojedince. Ponuditi ćemo najbolju kompenzaciju u industriji. Ako imate bilo kakva pitanja, slobodno nas kontaktirajte: [email protected]