Plasmidi-DNA, kuten vitro transkriptio (IVT) templaatti, on tärkeä raaka-aine mRNA:n valmistuksessa. Plasmidi-DNA:n korkea saanto, korkea puhtaus ja korkea saanto on tärkeintä tavoite plasmidiprosessin kehityksen aikana.
Yaohai Bio-Pharma tarjoaa yhden luukun ratkaisun plasmidien kehittämiseen, mukaan lukien ylävirran (fermentointi), alavirran (puhdistus) prosessien kehittämiseen ja prosessin karakterisointiin ja prosessin validointiin. Meillä on laaja kokemus plasmidisaannon parantamisesta ja sen eristämisestä monimutkaisista matriiseista kehittämällä ja optimoimalla fermentaatio-, puhdistus- ja epäpuhtauksien poistoprosesseja.
Plasmidin valmistuksen perusbioprosessi sisältää: Escherichia coli (E. coli) fermentointi, solujen kerääminen ja alkalinen lyysi, kirkastus, konsentrointi, kolmivaiheinen kromatografiaprosessi (sieppaus, välipuhdistus ja kiillotus) ja konsentrointi.
Palvelun yksityiskohdat | Yksikön toiminnot | parametrit |
E. coli käyminen |
Ravista pulloa | Elatusainekoostumukset, antibiootti, siirrosteen tilavuus, kasvulämpötila jne. |
fermentorissa (7 litraa) |
Antibiootti, siirrosteen tilavuus, kasvulämpötila, pH, liuennut happi (DO), syöttötapa (esim. syöttöerä), syöttöalusta, käymisaika jne. |
|
Solujen kerääminen | mikrosuodatus | Standardi E. coli sadonkorjuuprosessi |
Solujen hajoaminen | Solujen uudelleensuspendointi, alkalinen lyysi, neutralointi | Alkalisuhde, hajoamisaika |
Selvennys | Suodatus | Raakasuodatin, 20 µm ja 5 µm suodatinjono (suositeltava) |
Keskittyminen | Ultrasuodatus, tangentiaalinen virtaussuodatus | Huokoskoko (tai NMWC), Transmembraanipaine (TMP), virtaus, suodoksen tilavuuden ja kalvon pinta-alan suhde |
Kolmivaiheinen kromatografia | Kokoekskluusiokromatografia (SEC) tai geelisuodatuskromatografia (GFC) | Kolonnin pituus ja halkaisija, puskurin koostumus, injektiotilavuus, liikkuvan faasin koostumus (adsorptio ja desorptio), pH, virtausnopeus, tasapainotus, sitoutuminen, pesu ja eluointiolosuhteet. |
Affiniteettikromatografia (AF) | ||
Anioninvaihtokromatografia (AEX) | ||
Keskittyminen | Ultrasuodatus, tangentiaalinen virtaussuodatus | Huokoskoko (tai NMWC), Transmembraanipaine (TMP), virtaus, suodoksen tilavuuden ja kalvon pinta-alan suhde |
Lisää biologisia puhdistusprosessiratkaisuja |