Mukautettu saRNA-synteesi
Itsekerrosva mRNA (saRNA), myös tunnettu nimellä replicon RNA, koodaa in vitro -transkriptaatio-(IVT)mRNA- sekvenssejä ja virusten replikaasijen geenit, jotka perittyvät alphaviruksilta tai flaviviruksilta. Viruksen replikaasijen geenit mahdollistavat mRNA:n itsekerroksen, mikä johtaa lisättyyn proteiiniesitykseen ja vähimmäisdoseihin RNA:sta verrattuna ei-kerroviin mRNAt. Toinen näkökohta on, että saRNA on suhteellisesti iso molekyyli (yli 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma on kehittänyt joukon mRNA-synteesitekniikoita tarjotakseen ei-kerrovia mRNAja ja itsekerrovia mRNAja (1000 nt~14000 nt), kuten sekvenssien suunnittelu ja optimointi, IVT, puhdistus, lyofilisointi ja lipidinanojäännösten (LNP) kapselointi. Kaikki tuotteet julketaan tiukasti sovellettavissa laadunvalvontakriteereissä.
Kuva 1. Rakenteelliset ominaisuudet IVT-mRNA:issa: Perinteinen, Pyörremuotoinen ja Itsekerrova mRNA.
Itsekerrovan mRNA:n sekvenssiominaisuudet
Itse intensiivinen RNA koostuu neljästä ei-rakenteellisesta proteiinista (nimettyinä nsP1, nsP2, nsP3 ja nsP4), jotka johtuvat alphaviruksista, Venezuelasta peräisin olevista hevosiaivotulehdistä viruksesta (VEEV). Nämä proteiinit ovat nsP1, joka näyttää kaksiosaisen enzymaattisen toiminnan nimittäin GTasen ja N7MTasen, kun taas nsP2 omaa RTPasen aktiivisuuden, mikä on keskeistä IVT-mRNA:n kupitukseen Cap 0 -rakenteen luomiseksi. Lisäksi nsP2 toimii proteasaana ja helikasaana, edistämällä koko nsP-kompleksin monimutkaista prosessointia. nsP3:n tarkka funktio pysyy epäselvänä, mutta se osallistuu vuorovaikutukseen useiden iskupohja-proteiinien kanssa, mikä vaikuttaa iskupohjan antiviraaliseen vastaukseen.
Alphaviruksen alagenomisten promotori-alue (SGP) sijaitsee kiinnostavan geenin (GOI) edessä. SGP-alkio helpottaa GOI:n transkription aloittamista ohittamalla virusen nsP-proteiineja kodeeraavan sekvenssin lukemisen.
Kuva 2. eGFP saRNA:n synteesi ja soluassayt Yaohai Bio-Pharma RNASci Platformilla.
Mukautetut ratkaisut saRNA:lle
SaRNA:n synteesiprotokolla on samankaltainen rakenne kuin mRNA:llä: Mukautettu mRNA-synteesi
- Sekvenssin suunnittelu
- Plasmidi mallin valmistus
- in vitro -transkriptio (IVT)
- mRNA enzymikohtainen kattaminen
- mRNA ko-transkriptio kattaminen
- mRNA-puhdistus
- mRNA lyofilisointi
- LNP-inkapselointi
- Analyysi ja testaus
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
