آشکارسازی میزان دوز بهینه RNA گزارشگر eGFP

در زیست‌شناسی مولکولی و بیوتکنولوژی، پروتئین فلوئورسنت سبز افزایش یافته (eGFP) به دلیل توانایی تولید فلوئورسنس سبز قوی در طول موج 509 نانومتر به عنوان ژن گزارشگر کلیدی شناخته شده است. این پروتئین که ابتدا از بافraid هیدرا Aequorea victoria جدا شد، به عنوان نشانگر مستقیم در فرهنگ‌های سلولی ساکارومیسیس عمل می‌کند و به رصد و بهینه‌سازی کارایی تراسفکسیون کمک می‌کند. اما این سوال مطرح می‌شود: چه مقدار دوز بهینه RNA گزارشگر eGFP برای دستیابی به سطح بیان مورد نظر است؟

تحقیقات نشان داده است که کارایی RNA گزارشگر eGFP به شدت وابسته به مقدار آن است، به خصوص در زمینه RNA دایره‌ای (circRNA) و سیستم‌های mRNA خودتقوی (saRNA). مطالعات انجام‌شده توسط تیم کاترین رماوت در گروه تحقیقات نانوپزشکی دانشگاه گنت، رابطه پیچیده بین مقدار saRNA و کارایی ترجمه آن در سلول‌های بصری را بررسی کرده‌اند. آنها کشف کردند که مقدار کم saRNA، زیر آستانه فعال‌سازی سیستم ایمنی ذاتی، منجر به عبارت پروتئین کارآمد می‌شود. این موضوع اهمیت کنترل دقیق مقدار در استفاده از کل پتانسیل RNA گزارشگر eGFP را تأکید می‌کند.

در کاربردهای عملی، غلظت‌های معمولی mRNA eGFP می‌تواند از میکروگرم (μg) تا نانوگرم در میکرولیتر (ng/μL) متغیر باشد. به عنوان مثال، در آزمایش‌های تراسپکشن، دوزهای بین 0.05 μg تا 0.5 μg از mRNA eGFP نشان داده شده است که سطح عبارت معناداری را در انواع مختلف سلول‌ها ایجاد می‌کند، با درصد سلول‌های مثبت به حداکثر 99-100% در برخی موارد رسیده است. به ویژه، در دوزهای زیر 0.1 μg، saRNA سطح عبارت بالاتری نسبت به mRNA خطی نشان می‌دهد، که نشان‌دهنده مزیت خودتقویت‌شدنی آن است.

چندوجهی بودن RNA گزارشگر eGFP تنها به دلیل فلوئورسانس روشن و پایدار آن نیست بلکه به تطبیق‌پذیری آن با تنظیمات آزمایشی مختلف نیز بستگی دارد. محققان می‌توانند دوز را برای نیازهای خاص خود تنظیم کنند تا کنترل دقیقی بر سطح عبارت ژنی داشته باشند. این ویژگی باعث می‌شود که eGFP به یک ابزار ارزشمند برای مطالعه عملکرد ژن، نظارت بر تکثیر سلولی و بهینه‌سازی پروتکل‌های تراسپکشن تبدیل شود.

در نتیجه، مقدار بهینه دوز RNA گزارشگر eGFP بستگی زیادی به زمینه آزمایشگاهی و نتایج مورد نظر دارد. با انتخاب دقیق دوز مناسب، محققان می‌توانند توانایی کامل این ژن گزارشگر چندمنظوره را استفاده کنند و درک ما از مکانیسم‌های مولکولی را بهبود بخشند و نوآوری در بیوتکنولوژی را به جلو ببرند.

Yaohai Bio-Pharma اولین و بزرگترین شرکت اختصاصی به سیستم بیان میکروبی CRDMO در منطقه چین بزرگ است. ما به دنبال برآوردن نیازهای بالینی و تجاری مشتریان جهانی خود برای داروهای زیستی، واکسن‌ها و ابزارهای تشخیصی برای استفاده در انسان و دام هستیم.

ما همچنین به طور فعال در دنبال شرکای جهانی موسساتی یا افراد انفرادی هستیم. ما کمترین پاداش رقابتی را در صنعت ارائه می‌دهیم. اگر سوالی دارید، لطفاً حتماً با ما تماس بگیرید: [email protected]