فرآیند تولید mRNA eGFP

تولید رنای eGFP (پروتئین فلوئورسنت سبز افزوده) شامل سری از تکنیک‌های بیولوژی مولکولی برای تولید یک مولکول RNA عملکردی که برای بیان eGFP کدگذاری می‌کند، می‌شود. در حوزهٔ رنای eGFP، شرکت Yaohai Bio-Pharma تجربهٔ زیادی در پاسخگویی به نیازهای خاص مشتریان جمع آوری کرده است. با استفاده از تجربه‌های ما، فرآیند تولید رنای EGFP را به صورت یکپارچه طراحی کرده‌ایم.

1. کلونینگ ژن eGFP : برای به دست آوردن دنبالهٔ ژنی که برای eGFP کدگذاری می‌کند. این ژن معمولاً از یک وکتور پلاسمید موجود یا بر اساس دنبالهٔ نوکلئوتیدی شناخته شده به طور مصنوعی سنتز می‌شود. سپس ژن کلون شده از طریق سکوئنسینگ برای تأیید دقت بررسی می‌شود.
2. بهینه‌سازی ژن برای بیان : برای بیان بهینه در سیستم هدف (مانند سلول‌های پستاندار، باکتری یا سیستم‌های ترنسکریپش در محیط بیرونی)، ژن eGFP ممکن است بهینه‌سازی کدونیگی شود. این شامل جایگزینی کدون‌های نادر در دنباله اصلی با کدون‌هایی است که در سازگار با سازگاری با سازگاری با سازگاری با سازگاری با سازگاری با بیشتر استفاده می‌شوند در سازمان میزبان، که احتمال ترجمه کارآمد را افزایش می‌دهد.
3. در محیط بیرونی سلول آماده‌سازی الگوی ترنسکریپش : بعد از آنکه ژن بهینه‌شده آماده است، در یک وکتور مناسب، معمولاً یک پلاسمید، که عناصر تنظیمی لازم برای ترنسکریپش (مانند دنباله پروموتر) را در بر دارد، مستقر می‌شود. این پلاسمید به عنوان الگویی برای ترنسکریپش در محیط بیرونی عمل می‌کند.
4. در محیط بیرونی سلول ترنسکریپش : با استفاده از الیاف پلاسمید آماده، تراگیرشدن درون‌لبکی برای سنتز mRNA eGFP انجام می‌شود. این فرآیند شامل استفاده از انزیم‌های پلیمراز RNA است که دنباله پرومتر را تشخیص می‌دهند و تراگیرشدن را شروع می‌کنند، یک رشته RNA مکمل با الیاف DNA را تولید می‌کنند. بسته به کاربرد مورد نظر، mRNA ممکن است دارای کپ، پلی‌آدنیلیشن و/یا تغییراتی برای افزایش ثبات و کارایی ترجمه باشد.
5. پاکسازی و کنترل کیفیت : mRNA eGFP سنتز شده سپس پاکسازی می‌شود تا هرگونه آلودگی، از جمله DNA، پروتئین‌ها و نوکلئوتید آزاد حذف شود. روش‌های پاکسازی می‌توانند شامل الکتروفورز ژل، کرومتوگرافی ستونی یا جداسازی مبتنی بر ذرات مغناطیسی باشند. پس از پاکسازی، mRNA با استفاده از تکنیک‌هایی مانند طیف‌سنجی UV-Vis و الکتروفورز ژل برای کیفیت، شامل غلظت، خالصی و سالمی، بررسی می‌شود.
6. انبارداری و تحویل : RNA پیام eGFP تهیه شده معمولاً در دمای کم نگهداری می‌شود تا ثبات آن حفظ شود. برای استفاده در آزمایش، mRNA می‌تواند به روش‌های مختلفی به داخل سلول‌ها منتقل شود، از جمله الکتروپوراسیون، لیپوفکسیون یا وکتورهای ویروسی، بسته به کاربرد خاص و نوع سلول هدف.
7. بیان و تأیید : پس از ورود به داخل سلول، RNA پیام eGFP به پروتئین فلوrescent سبز تقویت‌شده ترجمه می‌شود، که می‌تواند با استفاده از میکروسکوپی فلوrescence مشاهده شود. این امکان را فراهم می‌کند که موفقیت در تولید، انتقال و بیان mRNA تأیید شود.

خلاصه، تولید RNA پیام eGFP شامل کلون کردن ژن، بهینه‌سازی آن برای بیان، آماده‌سازی الگوی ترانسکریپش in vitro، انجام واکنش ترانسکریپش، تصفیه RNA پیام حاصله و در نهایت انتقال آن به سلول‌ها برای بیان و تأیید است.

ما همچنین به طور فعال در دنبال شرکای جهانی موسساتی یا افراد انفرادی هستیم. ما کمترین پاداش رقابتی را در صنعت ارائه می‌دهیم. اگر سوالی دارید، لطفاً حتماً با ما تماس بگیرید: [email protected]