فرآیند ساخت mRNA ژن eGFP

تولید mRNA ژن eGFP (پروتئین فلورسنت سبز تقویت‌شده) شامل یک سری تکنیک‌های زیست‌شناسی مولکولی برای تولید یک مولکول RNA عملکردی است که برای بیان eGFP کد می‌کند. در زمینه mRNA eGFP، Yaohai Bio-Pharma تجربه گسترده ای در تامین نیازهای خاص مشتریان انباشته کرده است. ما با استفاده از تجربه خود، جریان فرآیند را برای تولید mRNA EGFP سنتز کرده‌ایم.

1. شبیه سازی ژن eGFP: برای بدست آوردن توالی ژن کد کننده برای eGFP. این ژن معمولاً از یک ناقل پلاسمید از قبل موجود کلون می شود یا به طور مصنوعی بر اساس توالی نوکلئوتیدی شناخته شده سنتز می شود. سپس ژن کلون شده از طریق توالی یابی برای اطمینان از صحت تأیید می شود.
2. بهینه سازی ژن برای بیان: برای بیان بهینه در سیستم هدف (به عنوان مثال، سلول های پستانداران، باکتری ها، یا سیستم های رونویسی آزمایشگاهی)، ژن eGFP ممکن است تحت بهینه سازی کدون قرار گیرد. این شامل جایگزینی کدون‌های کمیاب در توالی اصلی با کدون‌های پرمصرف‌تر در ارگانیسم میزبان است که شانس ترجمه کارآمد را افزایش می‌دهد.
3. در شرایط آزمایشگاهی آماده سازی الگوی رونویسی: هنگامی که ژن بهینه شده آماده شد، در یک ناقل مناسب، اغلب یک پلاسمید، که حاوی عناصر تنظیمی لازم برای رونویسی است (به عنوان مثال، یک توالی پروموتر) گنجانده می شود. این پلاسمید به عنوان الگویی برای رونویسی آزمایشگاهی عمل می کند.
4. در شرایط آزمایشگاهی رونویسی: با استفاده از الگوی پلاسمید آماده شده، رونویسی in vitro برای سنتز mRNA ژن eGFP انجام می شود. این فرآیند شامل استفاده از آنزیم‌های RNA پلیمراز است که توالی پروموتر را شناسایی کرده و رونویسی را آغاز می‌کند و یک رشته RNA مکمل برای الگوی DNA تولید می‌کند. بسته به کاربرد مورد نظر، mRNA ممکن است درپوش، پلی آدنیله و/یا اصلاح شود تا پایداری و کارایی ترجمه افزایش یابد.
5. تصفیه و کنترل کیفیت: سپس mRNA ژن eGFP سنتز شده برای حذف هر گونه آلاینده از جمله DNA، پروتئین ها و نوکلئوتیدهای آزاد خالص می شود. روش‌های خالص‌سازی می‌تواند شامل الکتروفورز ژل، کروماتوگرافی ستونی یا جداسازی بر پایه مهره باشد. پس از خالص سازی، mRNA برای کیفیت، از جمله غلظت، خلوص و یکپارچگی، با استفاده از تکنیک هایی مانند اسپکتروفتومتری UV-Vis و الکتروفورز ژل مورد تجزیه و تحلیل قرار می گیرد.
6. ذخیره سازی و تحویل: mRNA ژن eGFP خالص شده معمولاً در دماهای پایین برای حفظ ثبات ذخیره می شود. برای استفاده تجربی، mRNA را می توان با استفاده از روش های مختلف، از جمله الکتروپوراسیون، لیپوفکشن یا ناقل های ویروسی، بسته به کاربرد خاص و نوع سلول هدف، به سلول ها تحویل داد.
7. بیان و تأیید: هنگامی که در داخل سلول قرار می گیرد، mRNA eGFP به پروتئین فلورسنت سبز تقویت شده ترجمه می شود که می تواند با استفاده از میکروسکوپ فلورسانس قابل مشاهده باشد. این امکان تأیید تولید، تحویل و بیان موفق mRNA را فراهم می کند.

به طور خلاصه، تولید mRNA ژن eGFP شامل شبیه‌سازی ژن، بهینه‌سازی آن برای بیان، تهیه یک الگوی رونویسی آزمایشگاهی، انجام واکنش رونویسی، خالص‌سازی mRNA حاصل و در نهایت تحویل آن به سلول‌ها برای بیان و تأیید است.

ما همچنین به طور فعال به دنبال شرکای جهانی نهادی یا فردی هستیم. ما رقابتی ترین پاداش را در صنعت ارائه می دهیم. اگر سوالی دارید، لطفا با ما تماس بگیرید: [email protected]