کنترل کیفیت و کاربردهای پروتئین‌های بازسازی شده

کنترل کیفیت پروتئین‌های بازسازی شده برای اطمینان از قابلیت اعتماد و تکرارپذیری داده‌های آزمایشگاهی حیاتی است. هر مرحله، از طراحی پروژه تا فرآیند تولید، نیازمند راهبردهای صارم کنترل کیفیت است.

راهبردهای کنترل کیفیت

بخش صنعتی به رویه‌های عملیاتی استاندارد سختگیرانه پایبند است، در حالی که جامعه علمی باید دانش حرفه‌ای خود را بهبود بخشد تا قابلیت تکرارپذیری داده‌ها را افزایش دهد. پروتئین‌هایی که کاربردهای زیستی خاص یا ویژگی‌های بیوشیمیایی دارند، نیازمند راهبردهای کنترل کیفیت (QC) مخصوص هستند.

مثال‌های چالش‌برانگیز و راه‌حل‌ها

یائوهای بیو-فارما تجربه گسترده‌ای در تولید و پاک‌سازی پروتئین‌های بازسازی شده دارد و با وجود تیمی از کارشناسان، اطمینان می‌رساند که تولید پروتئین شما با درجه پاکی بالا انجام شود. با استفاده از تجربه‌های ما از صد ها پروژه، یائوهای به محض خلاصه می‌کند که چگونه می‌توان پاک‌سازی پروتئین را بهینه کرد.

پروتئین‌های متصل به اسید نوکلئیک: مرحله حذف اسید نوکلئیک، مانند نوکلزها یا ترکیب PEI، ضروری است. نسبت A260nm/A280nm برای شناسایی آلودگی اسید نوکلئیک پیگیری می‌شود.

فریتین زنجیر سنگین موش برای سی‌ryo-EM: مراحل تصفیه باید بهینه‌سازی شوند و نوکلزها باید اضافه شوند تا نسبت A260nm/A280nm کاهش یابد و خلوص پروتئین تضمین شود.

پروتئین هیبریدی دوگانه dsRBEC انسانی: شکستن سلول با استفاده از بافری شامل یورئا، دنبال آن تجدید شکل روی ستون برای به دست آوردن پروتئین‌های فعال عملکردی است.

پروتئین‌های متصل به کاتیون‌های دویی: کاتیون‌های دویی خاص باید در طول بیان و تصفیه اضافه شوند و از عوامل چلатор جلوگیری شود.

پروتئین‌های آهن-گوگرد: ایمیداژل باید اجتناب شود تا از تخریب خوشه [2Fe ± 2S] جلوگیری شود و تاکید بر گسترش صحیح پروتئین و عملکرد آن باشد.

بخش محلول LLT1: طراحی موتان بهینه سازی تشکیل پیوند دی‌سلفید و جمع شدن پروتئین را انجام می‌دهد که منجر به پروتئین‌های پایدار و با عملکرد بالا می‌شود.

بلور کردن کیناز CLK1: برداشت مشترک با فسفاتاز λ فسفات‌ها را از محلول‌های فسفری برداشته و کرومتوگرافی جداسازی اندازه (SEC) و کرومتوگرافی تعویض یونی مثبت برای کسب CLK1 همگن بدون فسفری‌سازی ناهمگن استفاده می‌شود.

پروتئین‌های مورد استفاده برای آنتی‌ژن: ارزیابی خالص بودن ضروری است تا آلودگی به پروتئین‌های ایمنی‌زا بالا را جلوگیری کند. برای آنتی‌بادی‌های اپیتوپ ساختاری، وضعیت سه‌بعدی آنتی‌ژن باید حفظ شود.

پروتئین‌های عرضه‌پذیر: استراتژی‌هایی مانند صفحه‌بندی استراین‌های مختلف و کاهش دماهای کشت برای محدود کردن مشکلات عرضه‌پذیری استفاده می‌شود و استراتژی‌های تصفیه سریع طراحی می‌شوند.

حذف اندوتوکسین: روش‌هایی مانند کرومتوگرافی بار مثبت و کرومتوگرافی وصالیتی لیگاند پلی‌کاتیون اندوتوکسین‌ها را حذف می‌کنند و مطمئن می‌شوند که سطح LPS زیر حدود کاربردی باشد.

پیچیده‌های پروتئینی: زیرواحد‌ها به طور مجزا بیان شده و سپس در محیط in vitro مونتاژ می‌شوند یا برای تشکیل پیچیده‌های عملکردی هم‌اکسپرسیون می‌شوند. سلامت پیچیده توسط همسانگردی و جرم مولی ارزیابی می‌شود.

نتیجه گیری

تولید پروتئین با طراحی استراتژیک آغاز می‌شود، با توجه به ویژگی‌های بیوشیمیایی و کاربردها. در طول بیان، تصفیه و کنترل کیفیت، شرایط و روش‌ها برای ثبات، عدم انجام‌شدگی و حالت اصلی بهینه‌سازی می‌شوند. پروتئین‌های تصفیه‌شده برای استفاده‌های مختلف پس‌ازخطی مورد استفاده قرار می‌گیرند، مانند مشخص‌سازی فیزیکی-شیمیایی.

شرکت Yaohai Bio-Pharma نیز به طور فعال در حال جستجوی همکاران سازمانی یا فردی در سطح جهانی است و کمپنسیشن رقابتی‌ترین صنعت را ارائه می‌دهد. اگر سوالی دارید، لطفاً آزادانه با ما تماس بگیرید: [email protected]