بهینه سازی فرآیند تصفیه برای انسولین نوترکیب انسانی

در سال‌های اخیر، رشد بیماران دیابتی باعث افزایش تقاضای انسولین شده است، اما انسولین مقرون‌به‌صرفه کمبود دارد. تولید انسولین کارآمد و اقتصادی بسیار مهم است. E. coli که عمدتاً از طریق Escherichia coli (E. coli) و مخمر به دلیل رشد سریع و هزینه کم تولید می شود، با پردازش پیچیده پایین دستی روبرو است.

مروری بر پردازش پایین دستی:

خالص سازی انسولین نوترکیب انسانی از اجسام گنجانده شده E. coli شامل مراحل متعددی از جمله بازیابی، شستشو، انحلال و اکسیداسیون، برش، تبادل بافر، خالص سازی کروماتوگرافیک، رسوب، تبدیل مجدد، برش آنزیمی، و فرمولاسیون است.

Yaohai Bio-Pharma دارای تجربه گسترده ای در تولید و تصفیه انسولین نوترکیب، همراه با تیمی از متخصصان است که تضمین می کند که تولید انسولین شما با راندمان بالا تکمیل می شود. Yaohai با استفاده از تجربه ما از صدها پروژه، نحوه بهینه‌سازی فرآیند تصفیه پایین‌دستی برای انسولین نوترکیب انسانی را خلاصه می‌کند.

بازیابی و شستشوی بدن شامل:

سلول ها با استفاده از روش های مکانیکی (مانند فراصوت، همگن سازی با فشار بالا) یا درمان با لیزوزیم و به دنبال آن بافرهای شستشو (حاوی اوره، تریتون X-100 و غیره) برای حذف ناخالصی ها مختل می شوند. در طول شستشو، پارامترها باید بهینه شوند تا از کیفیت پروتئین و در عین حال کنترل هزینه ها اطمینان حاصل شود.

انحلال و اکسیداسیون بدن شامل:

دناتوره‌کننده‌های با غلظت بالا (مانند گوانیدین هیدروکلراید و اوره) برای حل کردن اجسام انکلوژن، با افزودن دی تیوتریتول یا بتا مرکاپتواتانول برای جلوگیری از تشکیل پیوندهای دی سولفیدی نادرست، استفاده می‌شوند. pH و دما به طور قابل توجهی بر واکنش های انحلال و اکسیداسیون تأثیر می گذارد.

برش و تبادل بافر:

برش سیانوژن برومید برای حذف اسید آمینه آغازگر N ترمینال استفاده می شود، اما مسمومیت و مشکلاتی با ویژگی پایین ایجاد می کند. از طریق دیالیز، اولترافیلتراسیون، یا کروماتوگرافی حذف اندازه، تبادل بافر معرف های مضر را در آماده سازی برای عملیات های بعدی حذف می کند.

تصفیه و رسوب کروماتوگرافی:

تکنیک‌های کروماتوگرافی چندگانه برای خالص‌سازی انسولین، از جمله کروماتوگرافی میل ترکیبی، کروماتوگرافی تبادل یونی، کروماتوگرافی فاز معکوس، کروماتوگرافی برهمکنش آبگریز، و کروماتوگرافی حذف اندازه استفاده می‌شود. روش‌های رسوب‌گذاری، مانند رسوب pH و تبلور روی، برای حذف ناخالصی‌ها و تغلیظ پروتئین‌ها استفاده می‌شوند.

بازسازی مجدد:

پروتئین محلول شده در یک بافر renaturation رقیق می شود تا تشکیل صحیح پیوندهای دی سولفیدی و تاخوردگی پروتئین را تقویت کند. کروماتوگرافی مایع تاشوی پروتئین و دیالیز نیز روش هایی هستند که برای بازسازی طبیعی استفاده می شوند.

برش آنزیمی و فرمولاسیون:

از تریپسین و کربوکسی پپتیداز B برای جدا کردن پپتید C استفاده می شود و هترودایمر انسولین فعال را تشکیل می دهد. در نهایت، کریستالیزاسیون و لیوفیلیزاسیون برای حذف نمک‌ها و بافرهای باقی‌مانده، تهیه یک فرمول پایدار استفاده می‌شوند. افزودنی های خاص (مانند روی و پروتامین) برای رفع نیازهای بالینی مختلف اضافه می شود.

نتیجه:

پردازش پایین دست انسولین از باکتری E. coli پیچیده است. تمرکز آینده باید بر بهینه سازی این مراحل برای تولید کارآمد و اقتصادی برای پاسخگویی به تقاضا و کاهش هزینه ها باشد.

Yaohai Bio-Pharma نیز فعالانه به دنبال شرکای سازمانی یا فردی جهانی است و رقابتی ترین غرامت را در صنعت ارائه می دهد. اگر سوالی دارید، لطفا با ما تماس بگیرید: [email protected]