Rekombinantsete valkude kvaliteedikontroll ja rakendused

Rekombinantsete valkude kvaliteedikontroll on katseandmete usaldusväärsuse ja reprodutseeritavuse jaoks ülioluline. Iga samm, alates projekti kavandamisest kuni tootmisprotsessini, nõuab rangeid kvaliteedikontrolli strateegiaid.

Kvaliteedikontrolli strateegiad

Tööstussektor järgib rangeid standardseid tööprotseduure, samas kui akadeemiline ringkond peab andmete reprodutseeritavuse parandamiseks täiendama professionaalseid teadmisi. Spetsiifiliste bioloogiliste rakenduste või biokeemiliste omadustega valgud nõuavad kohandatud kvaliteedikontrolli (QC) strateegiaid.

Väljakutsuvad näited ja lahendused

Yaohai Bio-Pharmal on laialdased kogemused rekombinantsete valkude tootmisel ja puhastamisel koos ekspertide meeskonnaga, mis tagab, et teie valgu tootmine on lõpule viidud kõrge puhtusastmega. Kasutades sadade projektide kogemust, teeb Yaohai lahkelt kokkuvõtte, kuidas valgu puhastamist optimeerida.

Nukleiinhapet siduvad valgud: Nukleiinhapete eemaldamise etapid, nagu nukleaasid või PEI sadestamine, on vajalikud. Nukleiinhappega saastumise tuvastamiseks jälgitakse A260nm/A280nm suhet.

Hiire Ferritiin Heavy Chain 1 krüo-EM jaoks: Puhastusetappe tuleb optimeerida ja lisada nukleaase, et vähendada A260nm/A280nm suhet ja tagada valgu puhtus.

Inimese kimäärne valk dsRBEC: Rakkude lüüsimisel kasutatakse uureat sisaldavat puhvrit, millele järgneb funktsionaalselt aktiivsete valkude saamiseks kolonnis ümbervoltimine.

Kahevalentseid katioone siduvaid valke: Ekspressiooni ja puhastamise ajal tuleb lisada spetsiifilisi kahevalentseid katioone ning kelaativaid aineid tuleks vältida.

Raua-väävli valgud: Imidasooli kasutamist tuleks vältida, et vältida [2Fe ± 2S] klastri katkemist, tagades valkude õige voltimise ja funktsiooni.

LLT1 lahustuv fragment: Mutantide disain optimeerib disulfiidsidemete moodustumist ja valgu voltimist, mille tulemuseks on stabiilsed ja kõrge saagisega valgud.

CLK1 kinaasi kristalliseerimine: Koekspressioon λ-fosfataasiga eemaldab fosfaadid fosforüülimiskohtadest ning homogeense CLK1 saamiseks ilma heterogeense fosforüülimiseta kasutatakse suuruseralduskromatograafiat (SEC) ja anioonivahetuskromatograafiat.

Antigeenide kasutamiseks mõeldud valgud: Puhtuse hindamine on vajalik, et vältida saastumist väga immunogeensete valkudega. Struktuursete epitoobiantikehade puhul tuleb säilitada antigeeni kolmemõõtmeline konformatsioon.

Agregatsioonile kalduvad valgud: Agregatsiooniprobleemide piiramiseks kasutatakse selliseid strateegiaid nagu erinevate tüvede sõelumine ja kultiveerimistemperatuuride alandamine ning töötatakse välja kiired puhastusstrateegiad.

Endotoksiinide eemaldamine: Sellised meetodid nagu positiivse laengu kromatograafia ja polükatioonligandi afiinsuskromatograafia eemaldavad endotoksiinid, tagades, et LPS-i tase on alla rakenduspiiride.

Valgu kompleksid: Subühikuid ekspresseeritakse eraldi ja pannakse kokku in vitro või koosekspresseeritakse funktsionaalsete komplekside moodustamiseks. Kompleksi terviklikkust hinnatakse homogeensuse ja molaarmassi järgi.

Järeldus

Valgu tootmine algab strateegilise disainiga, võttes arvesse biokeemilisi omadusi ja rakendusi. Ekspressiooni, puhastamise ja kvaliteedikontrolli ajal optimeeritakse tingimused ja meetodid stabiilsuse, mitteagregatsiooni ja natiivse oleku jaoks. Puhastatud valgud teenivad mitmesuguseid allavoolu, näiteks biofüüsikalist iseloomustamist.

Yaohai Bio-Pharma otsib aktiivselt ka institutsionaalseid või individuaalseid ülemaailmseid partnereid ja pakub sektoris kõige konkurentsivõimelisemat tasu. Kui teil on küsimusi, võtke meiega julgelt ühendust: [email protected]