Puhastamisprotsessi optimeerimine rekombinantse inimsinsise jaoks

Viimastel aastatel on diabeedi pacientide kasvusangete põhjustanud insuliini nõude tõusu, kuid odavat insuliini on raske saada. Tõhus ja majanduslik insuliini tootmine on oluline. Insuliin toodetakse peamiselt Escherichia coli (E. coli) ja kümbluste abil, sest need kasvavad kiiresti ja kuluvad vähe, kuid E. coli allkompleksne järeltöötamine on keeruline.

Ülevaade järeltöötuse protsessist:

Rekombinantse inimsuguse insuliini töötlemine E. coli inklusiivsetest kehadest hõlmab mitmeid samme, sealhulgas taastamist, pesemist, dissolubiliseerimist ja oksidatsiooni, lõigamist, puffervahetust, kromaatiline puhastamine, sedimenteerimine, renatuurimine, enzyymne lõikamine ja vormindamine.

Yaohai Bio-Pharma võtab endale vastu laialdase kogemuse rekombinantse insuliini tootmisega ja puhastamisega, mis on sidunud ekspertide meeskonnaga, tagades, et teie insuliini tootmine lõpetatakse kõrge effektiivsusega. Kasutades oma kogemust sadetest projektidest, kokkuvõttes Yaohai, kuidas optimeerida rekombinantse inimsuguse insuliini järelpuhastamisprotsessi.

Sisalumbrude taastamine ja pesemine:

Rakkidele rakendatakse mehaanilisi meetodeid (näiteks ultraheli, kõrgepargi homogeeneerimine) või liisosüümi behandli, pärast mida kasutatakse pesepuhvreid (mis sisaldavad ureat, Triton X-100 jne), et eemaldada tainasained. Pesel on vaja parameetreid optimeerida, et tagada proteiini kvaliteet samal ajal, kui kontrollitakse kulusid.

Sisalumbrude dissolvisioon ja oksidatsioon:

Kasutatakse kõrgkonsentratsioonilisi denatuure (näiteks guaniinhydrokloriid ja urea), et dissooveerida sisalumbrud, lisades ditiotreitolit või β-merkaptsetanolit valed disulfiidsidevõtte moodustumise ennetamiseks. pH ja temperatuur mõjutavad oluliselt dissolvisiooni ja oksidatsioonireaktsioone.

Kleevine ja puhverivahetus:

Syanogeeni bromiidse katkestatamine kasutatakse N-terminaalse alguse aminohapeti eemaldamiseks, kuid see võib põhjustada märkimisväärsed toksitsuse ja madala spetsifiidsuse probleemid. Puhastusvahetuse abil, näiteks dialüüsiga, ultrafiltri või suuruspõhise hajutusseerumise abil, eemaldatakse ohtlikud reagentid järgnevate toimingute ettevalmistamiseks.

Kromatograafiline puhastamine ja sedimeerimine:

Insuliini puhastamiseks kasutatakse mitmeid kromatograafilisi tehnikaid, sealhulgas affinuskromatograafia, ioonivahetuskromatograafia, hydrofoobse interaktsiooni kromatograafia, vastupidise faasi kromatograafia ja suuruspõhist hajutusseerumist. Impuursuste eemaldamiseks ja proteiinide kontsentratsiooniks kasutatakse ka sedimeerimismeetodeid, nagu pH-sedimeerimine ja tsiinkristalliseerimine.

Renatuurimine:

Dissoldeeritud proteiini dilueeritakse renatuurimispuhastuses, mis edendab õigete disülfiidside ning proteiini kleepimise korrektset moodustumist. Proteiini kleepimiseks kasutatakse ka vedel kromatograafiat ja dialüüsi.

Enzyymiline katkestatamine ja vormindamine:

Tripsiin ja karboksipeptiidasa B kasutatakse C-peptidi mõlemiseks, moodustades aktiivse insuliini heterodümeer. Lõpuks kasutatakse krystalliseerimist ja liofiliseerimist jääksoolatite ja puhastuste eemaldamiseks, et ette valmistada stabiilne vormulering. Lisatakse spetsiaalseid lisasid (nagu tseen ja protamiin), et rahuldada erinevaid kliinilisi vajadusi.

Lõppkokkuvõte:

Insuliini järeltöötlus alltoonist E. coli on keeruline. Tulevikku peaks keskenduma neid samme optimeerimisele tõhusa ja majandusliku tootmise tagamiseks, et rahuldada nõudlust ja vähendada kulueid.

Yaohai Bio-Pharma otsib ka aktiivselt globaalseid partnerite institutsioonide või isikute naftas ning pakub tööstuses kõige konkurentsivõimsemaid tasusid. Kui teil on midagi küsimusi, siis ÄRGE HESITATE meiega ühendust võtta: [email protected]