Rekombinantse iniminsuliini puhastusprotsessi optimeerimine

Viimastel aastatel on diabeedihaigete kasv suurendanud nõudlust insuliini järele, kuid taskukohast insuliini napib. Tõhus ja ökonoomne insuliini tootmine on ülioluline. Kiire kasvu ja madala hinna tõttu toodetakse peamiselt Escherichia coli (E. coli) ja pärmi kaudu.

Järeltöötluse ülevaade:

Rekombinantse humaaninsuliini puhastamine E. coli inklusioonkehadest hõlmab mitut etappi, sealhulgas regenereerimist, pesemist, solubiliseerimist ja oksüdeerimist, lõhustamist, puhvrivahetust, kromatograafilist puhastamist, sadestamist, renatureerimist, ensümaatilist lõhustamist ja formuleerimist.

Yaohai Bio-Pharmal on laialdased kogemused rekombinantse insuliini tootmise ja puhastamise vallas koos ekspertide meeskonnaga, mis tagab, et teie insuliini tootmine on lõpule viidud kõrge efektiivsusega. Kasutades sadade projektide kogemust, teeb Yaohai lahkelt kokkuvõtte, kuidas optimeerida rekombinantse iniminsuliini puhastusprotsessi.

Kaasamise keha taastamine ja pesemine:

Rakud lõhustatakse mehaaniliste meetoditega (nagu ultraheliga töötlemine, kõrgsurve homogeniseerimine) või lüsosüümtöötlusega, millele järgneb lisandite eemaldamiseks pesupuhvrid (sisaldavad uureat, Triton X-100 jne). Pesemise ajal tuleb parameetreid optimeerida, et tagada valgu kvaliteet, kontrollides samal ajal kulusid.

Kaasatud keha lahustumine ja oksüdatsioon:

Inklusioonkehade lahustamiseks kasutatakse suure kontsentratsiooniga denaturante (nagu guanidiinvesinikkloriid ja uurea), millele lisatakse ditiotreitooli või β-merkaptoetanooli, et vältida valede disulfiidsidemete teket. pH ja temperatuur mõjutavad oluliselt lahustumis- ja oksüdatsioonireaktsioone.

Lõhustamine ja puhvrivahetus:

Tsüaanbromiidi lõhustamist kasutatakse N-otsa initsieeriva aminohappe eemaldamiseks, kuid see tekitab toksilisuse ja madala spetsiifilisusega probleeme. Dialüüsi, ultrafiltrimise või suuruseralduskromatograafia abil eemaldab puhvervahetus kahjulikud reaktiivid, et valmistuda järgmisteks operatsioonideks.

Kromatograafiline puhastamine ja sadestamine:

Insuliini puhastamiseks kasutatakse mitmeid kromatograafilisi meetodeid, sealhulgas afiinsuskromatograafiat, ioonivahetuskromatograafiat, pöördfaasikromatograafiat, hüdrofoobse interaktsiooni kromatograafiat ja suuruseralduskromatograafiat. Lisandite eemaldamiseks ja valkude kontsentreerimiseks kasutatakse sadestamismeetodeid, nagu pH-sadestamine ja tsingi kristallimine.

Renatureerimine:

Solubiliseeritud valk lahjendatakse renaturatsioonipuhvris, et soodustada disulfiidsidemete õiget moodustumist ja valgu voltimist. Renatureerimiseks kasutatakse ka valgu voltimist vedelikkromatograafiat ja dialüüsi.

Ensümaatiline lõhustamine ja koostis:

Trüpsiini ja karboksüpeptidaasi B kasutatakse C-peptiidi lõhustamiseks, moodustades aktiivse insuliini heterodimeeri. Lõpuks kasutatakse jääksoolade ja puhvrite eemaldamiseks kristallimist ja lüofiliseerimist, et valmistada stabiilne preparaat. Erinevate kliiniliste vajaduste rahuldamiseks lisatakse spetsiifilisi lisaaineid (nagu tsink ja protamiin).

Järeldus:

Insuliini edasine töötlemine alates E. coli on keeruline. Tulevikus tuleks keskenduda nende sammude optimeerimisele tõhusa ja ökonoomse tootmise jaoks, et rahuldada nõudlust ja vähendada kulusid.

Yaohai Bio-Pharma otsib aktiivselt ka institutsionaalseid või individuaalseid ülemaailmseid partnereid ja pakub sektoris kõige konkurentsivõimelisemat tasu. Kui teil on küsimusi, võtke meiega julgelt ühendust: [email protected]