E. coli raku terviklikkuse optimeerimine Biopharma tootmiseks

Biofarmatseutiliste ainete valdkonnas mängib Escherichia coli (E. coli) olulist rolli rekombinantsete valkude ekspressioonis peremeesorganismina. E. coli rakuline terviklikkus on valgu saagise, kvaliteedi ja tootmiskulude seisukohalt ülioluline. See terviklikkus hõlmab peamiselt sisemembraani (IM) ja välismembraani (OM) struktuuri ja funktsiooni.

Yaohai Bio-Pharmal on 15 aastat E. coli fermentatsiooni ja rekombinantse valgu ekspressiooni. Kasutame erinevaid strateegiaid, et säilitada kõrge E. coli rakkude terviklikkus, plasmiidi saagis ületab 1g/l 30-tunnise kultiveerimistsükli jooksul. Tuginedes ulatuslikele kogemustele mikroobide ekspressiooni alal, on Yaohai Bio-Pharma võtnud kokku mitmed tõhusad strateegiad E. coli rakulise terviklikkuse jälgimiseks ja parandamiseks biofarmatseutilise tootmise ajal.

E. coli raku terviklikkuse jälgimise meetodid

Voolutsütomeetria: kasutab raku olekute eristamiseks fluorestseeruvaid värvaineid, näiteks propiidiumjodiidi rakkude elujõulisuse tuvastamiseks ja SYTO9 OM-i läbilaskvuse hindamiseks. Kuid see nõuab plekkide ja keerukate toimingute kõrget maksumust.

Kolorimeetrilised meetodid: peegeldage rakkude lüüsi, tuvastades supernatandis DNA sisalduse, ensüümi aktiivsuse jne, kasutades näiteks PicoGreeni reaktiivikomplekti ja aluselise fosfataasi aktiivsuse teste. Need meetodid on aga tülikad ja nõuavad kalleid reaktiive.

Suure jõudlusega vedelikkromatograafia: kasutatakse rakuvälise toote kontsentratsioonide võrguühenduseta tuvastamiseks, et hinnata OM-i leket. Selle automatiseerimine on aga keeruline ja analüüsiaeg pikk.

Vibratsioonispektroskoopia tehnikad: näiteks lähi-infrapuna- ja keskmise infrapuna spektroskoopia, millel on potentsiaalseid rakendusi, kuid mis nõuavad spektraalsete häirete ja andmeanalüüsi väljakutsete ületamist.

Dielektriline spektroskoopia: hindab membraani terviklikkust, mõõtes rakususpensioonide impedantsi, võimaldades reaalajas võrguseiret. Siiski on see vastuvõtlik häiretele ja kalibreerimine on keeruline.

Biosensorid: suudavad tuvastada rakkudest või periplasmast lekkinud ühendeid, kuid seisavad silmitsi selliste probleemidega nagu anduri regenereerimise raskused.

Viskoossuse ja tiheduse mõõtmised: madalad kulud ja kiire analüüs, kuid puudub selektiivsus ja hinnangu andmiseks tuleb arvestada mitme partii andmetega.

Raku terviklikkust mõjutavad tegurid

Tüvetehnoloogia: muudab OM-i terviklikkust geenitehnoloogia abil, näiteks muteerib lipoproteiini geene, kuid võib mõjutada tüve kasvu.

Indutseeritud stress: Rekombinantsete valkude üleekspressioon põhjustab metaboolset koormust, mis mõjutab raku füsioloogiat. Seetõttu on ekspressioonitasemete mõistlik reguleerimine vajalik.

Substraadi söötmiskiirus: nii liiga kõrge kui ka madal söötmiskiirus mõjutavad rakkude lüüsi ja OM terviklikkust.

Temperatuur ja õhutamine: kõrged temperatuurid ja madal hapniku kättesaadavus suurendavad vastavalt ekspressioonistressi ja OM-leket, kuid spetsiifilised mõjud on erinevad.

Osmootikumid: kasutatakse periplasmaatiliste valkude vabastamiseks, kuid kahjustavad rakkude elujõulisust, piirates nende kasutamist.

Järeldus Tulevased uuringud peavad rakumembraani terviklikkuse täpseks kontrollimiseks süvenema membraani parandamise mehhanismidesse ja tingimustesse. Seiremeetodite optimeerimine ja mõjutegurite analüüsimine parandavad eeldatavasti toote kvaliteeti, aidates seeläbi kaasa biofarmatseutilise tööstuse arengule.

Otsime aktiivselt ka institutsionaalseid või individuaalseid globaalseid partnereid. Pakume valdkonna kõige konkurentsivõimelisemat tasu. Kui teil on küsimusi, võtke meiega julgelt ühendust aadressil [email protected]