E. coli raku terviklikkuse optimeerimine biopohjenduste tootmiseks

Biofarmatoodustete valdkonnas mängib Escherichia coli (E. coli) olulist rolli rekombinantsete proteiinide väljendamise hosina. E. coli rakusõbralikkus on otsustav proteiinide tootmiseks, kvaliteediks ja tootmiskuludeks. See sõbralikkus hõlmab peamiselt sisemise membraani (IM) ja välimise membraani (OM) struktuuri ja funktsiooni.

Yaohai Bio-Pharma on 15 aastat tegelema E. coli fermineerimisega ja rekombinantsete proteiinide väljendamisega. Me kasutame mitmesuguseid strateegiaid, et säilitada kõrge E. coli raku integriteedi, plasmidi tootlus ületab 1g/L 30-tunnise fermineerimisperioodi jooksul. Mikrobide väljendamise pikaajalise kogemuse alusel on Yaohai Bio-Pharma kokku leidnud mitmeid tõhusaid strateegiaid E. coli raku integriteedi jälgimiseks ja parandamiseks biofarmatoodustete tootmisel.

Tehnikad E. coli raku integriteedi jälgimiseks

Soolurongi analüüs: Kasutab fluoresentssete värivaraid erinevate soolora olukorra eristamiseks, näiteks propiidiumjoodi rakuc valimi tuvastamiseks ja SYTO9 omavalimustuse hinnangu andmiseks. See nõuab siiski kallide värvivara kulutusi ja keerulisi operatsioone.

Värvimetoodid: Nendega hindatakse rakkude lüümist DNA-sisu ja enzyymi tegevuse järele jälgides üleminekuväljavates, näiteks PicoGreen reagentikitsiga ja alkaline fosfataasi tegevuse analüüsidega. Need meetodid on aga taimetavad ja nõuavad kallist reagenti kasutamist.

Kõrge jõudluse vedel kromaatograafia: Selle abil tehakse ekstratsoorset toote koguse hindamiseks pärast analüüsi. Selle automatiseerimine on keeruline ja analüüs kestab kaua.

Vibratsioonilised spektroskoopiatoodid: Näiteks lähis-infrajaanee ja keskmine infrajaanee spektroskoopia, mis pakuvad potentsiaalseid rakendusi, kuid neid tuleb arendada edasi spetsiaalse spektralise segaduse ja andmeanalüüsi väljakutsete tõttu.

Dielektriline spektroskoopia: Hindab membraani terviklikkust, mõõtudes rakujuputiste impedantsi, mis võimaldab reaalajas online jälgimist. Kuid see on tundlik häirede suhtes ja kalibreerimine on raske.

Biosensorid: Võivad tuvastada rakkede või periplaasi sees voolunud liike, kuid neil on probleeme, nagu sensori taastamise raskused.

Viskosuse ja tiheuse mõõtmised: Nad on madalama hinna ja kiire analüüsiga, kuid puuduvad valikuoskuses ja nende hinnangu andmiseks tuleb arvesse võtta mitme tootmisparandi andmeid.

Rakaterviklikkuse mõjutavad tegurid

Põlevkonna inžeerimine: Muudab OM terviklikkust geneetilise inžeerimise abil, näiteks lipoproteiini geenide mutatsioonide teel, kuid see võib mõjutada põlevkonna kasvu.

Indutseeritud stress: Rekombinantsete proteiinide üleavaldis käigub metabooline koormus, mis mõjutab rakke füsioloogiat. Seega on vaja avaldistaset reguleerida rationaalselt.

Aluseandmete toimetamine kiirus: Nii liialt kõrge kui ka liiga madal toimetamiskiirus mõjutab rakke lüsimist ja OM terviklikkust.

Temperatuur ja aeratsioon: Kõrge temperatuur ja madal syrga saadavus suurendavad vastavalt stressi väljendumist ja OM voolustumist, kuid spetsiifilised mõjud varimeerivad.

Osmootika: Kasutatakse periplaasmaliste teoste vabastamiseks, kuid neid piirab rasked mõjud hülgade elujõule.

Johtopetus Tulevane uurimine peab uurima sügavamalt membraanikorralduse mehhanisme ja tingimusi, et kontrollida täpselt hülgade membraani tervislikkust. Monitorimismeetodite optimeerimine ja mõjutegurite analüüs on oodatavalt produkti kvaliteedi parandamisel ning see edendab biotehnoloogia tööstuse arengut.

Me otsime ka aktiivselt institutsioonilisi või individuaalseid maailmasuguseid partnereid. Me pakume tööstuses kõige konkurentsivõimelisemat väljavõtet. Kui teil on midagi küsimusi, palun võtke vabalt meiega ühendust aadressil [email protected]