eGFP mRNA tootmisprotsess

eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA tootmine hõlmab mitmeid molekulaarbioloogia meetodeid, et luua funktsionaalne RNA molekul, mis kodeerib eGFP ekspressiooni. eGFP mRNA valdkonnas on Yaohai Bio-Pharma kogunud laialdased kogemused klientide spetsiifiliste vajaduste rahuldamiseks. Kasutades oma kogemusi, oleme sünteesinud EGFP mRNA tootmise protsessi.

1. eGFP geeni kloonimine: eGFP-d kodeeriva geenijärjestuse saamiseks. See geen kloonitakse tavaliselt juba olemasolevast plasmiidvektorist või sünteesitakse kunstlikult teadaoleva nukleotiidjärjestuse alusel. Seejärel kontrollitakse kloonitud geeni täpsuse tagamiseks sekveneerimisega.
2. Geeni optimeerimine ekspressiooni jaoks: optimaalseks ekspressiooniks sihtsüsteemis (nt imetajarakud, bakterid või in vitro transkriptsioonisüsteemid) võib eGFP geen läbida koodoni optimeerimise. See hõlmab originaaljärjestuse haruldaste koodonite asendamist peremeesorganismis sagedamini kasutatavatega, suurendades seeläbi tõhusa translatsiooni võimalusi.
3. In vitro Transkriptsioonimalli ettevalmistamine: Kui optimeeritud geen on valmis, lülitatakse see sobivasse vektorisse, sageli plasmiidi, mis sisaldab transkriptsiooniks vajalikke regulatoorseid elemente (nt promootorjärjestus). See plasmiid toimib in vitro transkriptsiooni matriitsina.
4. In vitro transkriptsioon: Kasutades ettevalmistatud plasmiidi matriitsi, viiakse eGFP mRNA sünteesimiseks läbi in vitro transkriptsioon. See protsess hõlmab RNA polümeraasi ensüümide kasutamist, mis tunnevad ära promootorjärjestuse ja käivitavad transkriptsiooni, luues DNA matriitsile komplementaarse RNA ahela. Sõltuvalt soovitud rakendusest võib mRNA olla kaetud, polüadenüülitud ja/või modifitseeritud, et suurendada stabiilsust ja translatsiooni efektiivsust.
5. Puhastamine ja kvaliteedikontroll: Seejärel puhastatakse sünteesitud eGFP mRNA, et eemaldada kõik saasteained, sealhulgas DNA, valgud ja vabad nukleotiidid. Puhastusmeetodid võivad hõlmata geelelektroforeesi, kolonnkromatograafiat või graanulitepõhist eraldamist. Pärast puhastamist analüüsitakse mRNA kvaliteeti, sealhulgas kontsentratsiooni, puhtust ja terviklikkust, kasutades selliseid meetodeid nagu UV-Vis spektrofotomeetria ja geelelektroforees.
6. Ladustamine ja kohaletoimetamine: Puhastatud eGFP mRNA-d säilitatakse tavaliselt stabiilsuse säilitamiseks madalatel temperatuuridel. Eksperimentaalseks kasutamiseks saab mRNA-d rakkudesse toimetada erinevate meetoditega, sealhulgas elektroporatsiooni, lipofektsiooni või viirusvektoritega, olenevalt konkreetsest rakendusest ja sihtraku tüübist.
7. Väljendamine ja kontrollimine: Rakku sisenedes transleeritakse eGFP mRNA täiustatud roheliseks fluorestsentsvalguks, mida saab visualiseerida fluorestsentsmikroskoopia abil. See võimaldab kontrollida edukat mRNA tootmist, kohaletoimetamist ja ekspressiooni.

Kokkuvõttes hõlmab eGFP mRNA tootmine geeni kloonimist, selle optimeerimist ekspressiooniks, in vitro transkriptsioonimatriitsi valmistamist, transkriptsioonireaktsiooni läbiviimist, saadud mRNA puhastamist ja lõpuks ekspressiooniks ja kontrollimiseks rakkudesse viimist.

Otsime aktiivselt ka institutsionaalseid või individuaalseid globaalseid partnereid. Pakume valdkonna kõige konkurentsivõimelisemat tasu. Kui teil on küsimusi, võtke meiega julgelt ühendust: [email protected]