EGFP mRNA tootmisprotsess

EGFP (Tugevdatud Roheline Fluoresentsne Protsein) mRNA tootmise protsess hõlmab mitmeid molekulaarbioloogia tehnikaid funktsionaalse RNA molekuli loomiseks, mis kodeerib eGFP ekspresseerimiseks. eGFP mRNA valdkonnas on Yaohai Bio-Pharma kogunud laialdast kogemust klientide spetsiifiliste nõuete rahuldamisel. Meie kogemuse alusel oleme sünteesinud protsessivooga eGFP mRNA tootmiseks.

1. EGFP Geeni Kloonimine : Selleks tuleb saada gene sekvens, mis kodeerib eGFP-le. See gene kloonitakse tavaliselt juba olemasoleva plasmidivektori või tekitatakse kunstlikult teadmistel põhuvatel nukleotiidisekventsidel. Kloonitud gene kontrollitakse siis sekveneerimise abil tagamaks täpsus.
2. Geeni Optimeerimine Ekspresioonile : Optimaalseks väljenduseks sihtmoodulis (nt loomlaste, bakterite või in vitro transkriptsioonisüsteemides) võib eGFP geen läbida koolonoptimeerimist. See hõlmab algse järjestuse harva esinevate koolonite asendamist neid hostorganismis sagedamini kasutatavate koolonitega, mis suurendab tõenäosust efektiivsest transleetsioonist.
3. In vitro Transkriptsiooni malli ettevalmistamine : Kui optimeeritud gene on valmis, integreeritakse see sobiva vektori, sageli plasmidi, sisemisse, mis sisaldab transkriptsiooni jaoks vajalikke regulatiivseid elemente (nt promotorisektsiooni). See plasmid teenib in vitro transkriptsiooni mallina.
4. In vitro Transkriptsioon : Ettevalmistatud plasmidi malli kasutades toimub in vitro transkriptsioon, et sünteesida eGFP mRNA. See protsess hõlmab RNA polümeraasi enzyymi kasutamist, mis tuvastavad promootoriseeria ja algustavad transkriptsiooni, toodudes DNA-mallile vastav RNA-lõige. Sõltuvalt soovitud rakendusest võib mRNA olla kapsleeritud, polüadenüleeritud ja/või muudetud, et suurendada selle stabiilsust ja tõlgetoimsust.
5. Puhastamine ja kvaliteedikontroll : Süntetiseeritud eGFP mRNA puhastatakse seejärel kontaminate eemaldamiseks, sealhulgas DNA-d, proteiine ja vaba nukleotiide. Puhastamismeetodid võivad hõlmata geleelektrofooreesit, veerukaaslaste kromaatograafiad või paremipõhise eraldamise meetodeid. Puhastamise järel analüüsitakse mRNA kvaliteeti, sealhulgas kontsentratsiooni, puhtust ja täielikkust, kasutades tehnikaid nagu UV-Vis spektroofotomeetria ja geleelektrofooreesit.
6. Hoidmine ja toimetamine : Puhastatud eGFP mRNA talletatakse tavaliselt madalates temperatuurides, et säilitada selle stabiilsus. Eksperimentaalse kasutuse jaoks saab mRNA toimetada rakudesse mitmel viisil, sealhulgas elektroporatsiooniga, lipefektsiooniga või viiruvektorite abil, sõltuvalt konkreetsest rakendusest ja sihtmärgist rakkude tüübist.
7. Ekspresseerimine ja kontroll : Kui see on sisse minevikku rakku, tõlgendatakse eGFP mRNA parandatud rohelise fluoresentsproteini, mida saab näha fluoresentsmikroskoobiga. See võimaldab veenduda edukast mRNA tootmise, toimetamise ja ekspresseerimise kohta.

Lühidalt öeldes hõlmab eGFP mRNA tootmist gene kloonimist, tema optimeerimist ekspresseerimiseks, in vitro transkriptsiooni malli ettevalmistamist, transkriptsioonireaktsiooni tegemist, tuleneva mRNA puhastamist ning lõpuks selle toimetamist rakkudele ekspresseerimise ja kontrollimiseks.

Oleme samuti aktiivselt otsimas institutsioonilisi või isiklike globaalseid partnereid. Pakume tööstuses kõige konkurentsivõimsamat kompensatsiooni. Kui teil on mingeid küsimusi, palun ei esitage kontaktimist: [email protected]