Reporteri RNA modifitseerimise meetodid

Kui valida, milline reporter-mRNA modifikatsioonide meetod on eelistatavam, ei ole kindlat vastust, kuna igal meetodil ja reportergeenil on oma eelised ja rakendatavad stsenaariumid. Siin on mõned levinumad mRNA modifitseerimismeetodid ja reportergeenid koos nende omaduste ja sobivusega.

mRNA modifitseerimise meetodid

Metüülimine:

1. m6A: Seotud mRNA stabiilsuse, splaissimise, translatsiooni ja miRNA töötlemisega. Avastamisprobleemid hõlmavad antikehade valikut ja lokaliseerimist.
2. 5' Cap Nm: suurendab stabiilsust, splaissimist, polüadenüülimist ja tuumaeksporti. Aitab eristada oma-RNA-d võõrast RNA-st.
3. Pseudouridüülimine: Muudab koodoneid, suurendab stabiilsust ja reageerib stressile. Katalüüsivad pseudouridiini süntaasid.

Mittelooduslike nukleotiidide tutvustus:

1. Kasutusele võetud transkriptsiooni ajal kahe keemilise modifitseerimise strateegiaga. See suurendab stabiilsust, tõhusust ja valgu ekspressiooni.

Reporter Genes

1. Rohelise fluorestseeruva valgu geen (GFP): Eelised: kergesti tuvastatav, stabiilsed fluorestsentsomadused, rakkudele mittetoksiline, sobib elusrakkude pildistamiseks. Puudused: Piiratud fluorestsentsi intensiivsus.
2. Tõhustatud roheline fluorestsentsvalk (eGFP): Eelised: üle 6 korra heledam kui metsiktüüpi GFP, muutes selle sobivamaks reportergeeniks geeniekspressiooni, regulatsiooni, rakkude diferentseerumise ning valkude lokaliseerimise ja transpordi uurimiseks organismides.
3. Punased fluorestseeruvad valgud (nt mCherry): Eelised: pikemad ergastus- ja emissioonilainepikkused, mille tulemuseks on madalam taust rakusisese pildistamise ajal, suurepärane fluorestsentsi heledus ja fotostabiilsus ning madalam raku toksilisus. Puudused: ei pruugi teatud katsetingimustes olla nii levinud kui GFP.
4. Firefly lutsiferaas: Eelised: ATP, magneesiumioonide ja hapniku juuresolekul võib see katalüüsida lutsiferiini oksüdeerumist oksülutsiferiiniks, kiirgades bioluminestsentsi. See sobib kasutamiseks kontrollina, et uurida sihtgeenide translatsiooni efektiivsust imetajarakkudes, rakkude elujõulisust ja in vivo pildianalüüse.

Järeldus

Kui valida, milline reporter-mRNA modifikatsioonide meetod on eelistatavam, sõltub see konkreetsetest katseeesmärkidest, uurimistöö taustast ja katsetingimustest. Näiteks kui on vaja suurt tundlikkust, võib eGFP olla parem valik. Kui taustahäirete vähendamiseks on vaja pildistada pikematel lainepikkustel, võivad punaselt fluorestseeruvad valgud, nagu mCherry, olla sobivamad. Lisaks saab mRNA spetsiifiliste modifitseerimisvajaduste põhjal (nt stabiilsuse suurendamine, translatsiooni efektiivsuse parandamine) valida vastava modifitseerimismeetodi.

Esimese ja suurima mikroobide bioloogiliste ravimite CRDMO-na Suur-Hiinas pakub Yaohai Bio-Pharma kõikehõlmavaid ühtseid kohandatud lahendusi või eraldiseisvaid teenuseid alates RNA sünteesist, tüvede konstrueerimisest ja ehitamisest, protsesside üles- ja allavoolu arendamisest kuni GMP-ni või mitte. - GMP tasemel ravimainete tootmine ning täitmis- ja viimistlusteenused erinevatele viisidele, nagu mRNA, tsircRNA, plasmiidne RNA, rekombinantne valgud, peptiidid, ensüümid, ühedomeenilised antikehad ja VLP-d inimestele ja veterinaarias kasutamiseks.

Yaohai Bio-Pharma otsib aktiivselt ka institutsionaalseid või individuaalseid ülemaailmseid partnereid ja pakub sektoris kõige konkurentsivõimelisemat tasu. Kui teil on küsimusi, võtke meiega julgelt ühendust: [email protected]