mRNA-Integrität
Die Bedeutung der mRNA-Integritätsanalyse
mRNAs sind für ihre inhärente Instabilität bekannt und neigen bei Einwirkung externer Faktoren zur Fragmentierung, insbesondere während der In-vitro-Transkription (IVT) und bei Aufreinigungsprozessen, bei denen allgegenwärtige Nukleasen eine Herausforderung darstellen. Die Bewertung der mRNA-Integrität ist für die anschließende Entwicklung mRNA-basierter Medikamente von entscheidender Bedeutung, da sie sowohl Sicherheit als auch Produktverfügbarkeit gewährleistet.
Yaohai-BioPharma bietet umfassende mRNA-Integritätstests an und verwendet dabei Methoden wie Agarosegelelektrophorese (AGE), Kapillarelektrophorese (CEG) und Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) und hält dabei sowohl für Forschungs- als auch für klinische Studien strenge Qualitätsstandards ein.
Regulatorische Anforderungen an die mRNA-Integrität
Gemäß den regulatorischen Erwägungen der WHO gilt „die Integrität der mRNA-Struktur als kritisches Qualitätsmerkmal für die Freigabe der mRNA. Daher ist eine Kontrolle der mRNA-Integrität, des Prozentsatzes intakter mRNA, des Prozentsatzes mRNA-Fragmente usw. erforderlich.“
Analytische Methode
Analyse |
Methoden |
mRNA-Integrität |
AGE, AgarosegElektrophorese |
CGE,Kapillarelektrophorese |
CGE-LIF, Kapillargelelektrophorese mit lichtinduzierter Fluoreszenzdetektion |
mRNA-Integrität durch Agarosegelelektrophorese
Die Agarose-Gelelektrophorese ist eine weit verbreitete Technik zur Bewertung der Integrität der Gesamt-RNA. Dabei wird die RNA-Probe auf einem denaturierenden Agarosegel ausgeführt, das entweder mit Ethidiumbromid oder SYBR Green gefärbt ist. Das denaturierende Gel aus Agarose erleichtert die Trennung der RNA nach Größe, wenn ein elektrischer Strom angelegt wird. Während die negativ geladene RNA zum positiven Ende des Gels wandert, bewegen sich kleinere Fragmente schneller, was zu einer größenbasierten Sortierung der RNA-Moleküle führt.
mRNA-Integrität durch Kapillargelelektrophorese
Die Kapillargelelektrophorese (CGE) ist ein hochauflösender analytischer Ansatz, der entscheidend zur Messung der Integrität von RNA-Molekülen anhand ihrer Länge ist. Diese Bewertung ist von Bedeutung für die Qualitätssicherung, das Verständnis der Wirksamkeit und die Optimierung von Herstellungsprozessen. Ähnlich wie bei der Agarose-Gelelektrophorese wird bei der CGE ein elektrischer Strom verwendet, um RNA-Fragmente anhand ihrer Ladung und Größe zu trennen. Bei der CGE wird eine Kapillare mit einer Trenngelmatrix gefüllt, die mit einem fluoreszierenden Farbstoff getränkt ist. Die Bewegung der RNA entlang der Kapillare hängt von ihrer Größe ab und die Erkennung erfolgt mithilfe von Ultraviolett- (UV) oder lichtinduzierten Fluoreszenz- (LIF) Detektoren.
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