Identifizierung und Menge der LNP-Lipidzusammensetzung
Die Bedeutung der Analyse der LNP-Lipidzusammensetzung
Lipidnanopartikel (LNPs), die aus kationischen Lipiden, Cholesterin, Phospholipiden und PEG-konjugierten Lipiden bestehen, dienen als wichtige Trägersysteme für mRNA-Arzneimittel. Die Stabilität und die Doppelschichtflüssigkeit von LNPs hängen von den Eigenschaften und dem Gehalt der verschiedenen im Formulierungssystem verwendeten Lipide ab. Die Zusammensetzung der Lipide ist sehr wichtig für die Wirksamkeit der Arzneimittelabgabe durch LNPs.
Yaohai-BioPharma bietet Lösungen zur Identifizierung und Quantifizierung der mRNA-LNP-Lipidzusammensetzung unter Verwendung der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie mit geladener Aerosoldetektion (HPLC-CAD).
Regulatorische Anforderungen an die Lipidzusammensetzung
Gemäß den regulatorischen Erwägungen der WHO sollte „die endgültige Zusammensetzung des Impfstoffs, einschließlich der Lipide, zusammen mit der Menge der Komponenten in jeder Darreichungsform beschrieben werden.“
Analytische Methode
Analyse |
Methoden |
Lipidzusammensetzung |
HPLC kombiniert mit Corona Charged Aerosol Detector (CAD) |
Verfahren
Schritt 1. Vorbereitung der Lipidprobe
Die Wahl des Verdünnungsmittels ist für die Analyse von Lipidkomponenten in mRNA-LNP-Arzneimitteln von größter Bedeutung. Das Verdünnungsmittel sollte jede Lipidkomponente effektiv auflösen und jegliche Wechselwirkungen zwischen Lipiden und eingekapselter mRNA unterbrechen. Mögliche Verdünnungsmittel umfassen Ethanol, Ethanol/Dimethylsulfoxid (DMSO), Ethanol/Formamid, Ethanol/Triethylaminacetat und andere.
Schritt 2. HPLC-CAD
Die Umkehrphasen-Flüssigkeitschromatographie (RP-HPLC) in Kombination mit einem geladenen Aerosoldetektor (CAD) wurde in die Prüfung der LNP-Lipidzusammensetzung integriert. Da Lipiden Chromophore fehlen und sie ohne Derivatisierung keine ultraviolette (UV-)Strahlung absorbieren, ist die Verflüchtigung normalerweise eine Herausforderung. CAD ist empfindlicher und kann ein breiteres Spektrum des Lipidgehalts erkennen. Zuvor wurde eine Ultrahochleistungs-Flüssigkeitschromatographie (UHPLC) in Kombination mit einem geladenen Aerosoldetektor (CAD) entwickelt und in der Lipidanalyse für Studien zu kleinen interferierenden RNAs (siRNA) für LNPs angewendet.
Schritt 3. Datenanalyse
Die Menge jedes Lipids in der Probe wurde anhand der Standardkurve multipliziert mit dem Verdünnungsfaktor berechnet. Dieser Prozess ergab den Lipidgehalt für jeden Bestandteil in der mRNA-LNP-Probe.
Fallbeispiel einer LNP-Lipidzusammensetzungsanalyse mit HPLC-CAD
Basierend auf HPLC-CAD hat Yaohai-BioPharma eine robuste Methode zur Analyse von Lipidkomponenten von mRNA-LNP entwickelt. Diese Methode wurde als linear, wiederholbar, präzise, genau und spezifisch für LNP-Formulierungen validiert, was die Prozessentwicklung, Formulierungsentwicklung, Stabilitätstests und mRNA-LNP-Freisetzung unterstützen könnte.
Chromatographisches Profil von 4 Lipiden mit der HPLC-CAD-Methode von Yaohai-BioPharma
Die Linearität der HPLC-CAD-Methode von Yaohai-BioPharma (R2＞0.99)
EN
