mRNA-integritet
Betydningen af mRNA-integritetsanalyse
mRNA'er er anerkendt for deres iboende ustabilitet og er modtagelige for fragmentering i nærvær af eksterne faktorer, især under in vitro transkription (IVT) og oprensningsprocesser, hvor allestedsnærværende nukleaser udgør en udfordring. Evaluering af mRNA-integritet er afgørende i den efterfølgende udvikling af mRNA-baserede lægemidler, hvilket sikrer både sikkerhed og produkttilgængelighed.
Yaohai-BioPharma leverer omfattende mRNA-integritetstesttjenester, der anvender metoder som agarosegelelektroforese (AGE), kapillærelektroforese (CEG) og højtydende væskekromatografi (HPLC), der overholder strenge kvalitetsstandarder for både forskning og kliniske forsøg.
Regulatoriske krav til mRNA-integritet
Ifølge WHO's lovgivningsmæssige overvejelser anses integriteten af strukturen af mRNA'et for at være en kritisk kvalitetsegenskab for frigivelsen af mRNA'et. Der er således behov for kontrol for mRNA-integritet, procentdel intakt mRNA, procentdel mRNA-fragmenter og så videre.”
Analytisk metode
Analyse |
Metoder |
mRNA integritet |
AGE, Agarosegel elektroforese |
CGE,Kapillær elektroforese |
CGE-LIF, Kapillær gelelektroforese med lysinduceret fluorescensdetektion |
mRNA-integritet ved agarosegelelektroforese
Agarosegelelektroforese er en meget anvendt teknik til at evaluere integriteten af totalt RNA. Dette involverer at køre RNA-prøven på en denaturerende agarosegel, farvet med enten ethidiumbromid eller SYBR Green. Den denaturerende gel, sammensat af agarose, letter adskillelsen af RNA baseret på størrelse, når en elektrisk strøm påføres. Når det negativt ladede RNA migrerer mod den positive ende af gelen, bevæger mindre fragmenter sig hurtigere, hvilket resulterer i en størrelsesbaseret sortering af RNA-molekyler.
mRNA-integritet ved kapillær gelelektroforese
Kapillær gelelektroforese (CGE) står som en analytisk tilgang med høj opløsning, der er afgørende for at måle integriteten af RNA-molekyler efter længde. Denne vurdering har betydning for kvalitetssikring, styrkeforståelse og optimering af fremstillingsprocesser. I lighed med agarosegelelektroforese bruger CGE en elektrisk strøm til at adskille RNA-fragmenter baseret på deres ladning og størrelse. I CGE fyldes en kapillar med en separationsgelmatrix infunderet med et fluorescerende farvestof. Bevægelsen af RNA langs kapillæren er betinget af dens størrelse, og detektion opnås ved hjælp af ultraviolet (UV) eller lys-induceret fluorescens (LIF) detektorer.
EN
