Trong quá trình chuẩn bị mRNA phiên mã in vitro (IVT), DNA plasmid được tuyến tính hóa được yêu cầu làm mẫu phiên mã cho IVT với sự trợ giúp của T7 RNA polymerase. DNA plasmid chất lượng cao rất quan trọng cho quá trình sao chép in vitro.
Dựa trên nền tảng dịch vụ chuẩn bị plasmid trưởng thành, Yaohai Bio-Pharma có thể cung cấp dịch vụ chuẩn bị DNA plasmid tuyến tính có độ tinh khiết cao và tiêu chuẩn cao để đạt được quá trình phiên mã IVT hiệu quả.
Quy trình xét duyệt | Dịch vụ tùy chọn | Chi tiết dịch vụ | Thời gian giao hàng (Ngày làm việc) |
Chuẩn bị plasmid tròn | tổng hợp gen | Tổng hợp gen (bên thứ ba) | 7-10 |
khuếch đại plasmid | khuếch đại plasmid | 2 | |
Chiết xuất plasmid | |||
Chuẩn bị plasmid tuyến tính hóa | Tuyến tính hóa và tinh chế plasmid | Tuyến tính hóa plasmid | 1 |
Tinh lọc DNA tuyến tính hóa | |||
Kiểm soát chất lượng DNA plasmid | Độ tinh khiết nồng độ | Đo quang phổ tia cực tím (UV) | 1-2 |
cấu trúc plasmid | Điện di trên gel agarose (AGE) | ||
Điện di mao mạch (CE)-tùy chọn | |||
Xác định plasmid | Nhận dạng enzyme giới hạn/ AGE |
Lựa chọn linh hoạt các phương pháp tuyến tính hóa
Tối ưu hóa phương pháp tách chiết và tinh sạch DNA để đạt tỷ lệ thu hồi cao.
Các tiêu chuẩn kiểm soát quy trình nghiêm ngặt, với tỷ lệ hình dạng siêu xoắn của các mẫu plasmid cho nghiên cứu trên 80%.
Dịch vụ chuẩn bị và kiểm soát chất lượng plasmid tiêu chuẩn và hiệu quả cao nhằm đáp ứng nhu cầu thí nghiệm.
Lấy sản phẩm mRNA_luciferase trong danh mục Yaohai Bio-Pharma làm ví dụ, mẫu plasmid mẫu phiên mã (cấp nghiên cứu) có tỷ lệ siêu xoắn hơn 90%, tỷ lệ tuyến tính hóa gần 100% và tỷ lệ phiên mã tiếp theo lên tới 1:200 ( DNA plasmid được tuyến tính hóa:mRNA).
mRNA_luciferase thu được thông qua việc chuẩn bị một plasmid được tuyến tính hóa làm mẫu được chuyển vào các tế bào 293T và hoạt tính phản ứng enzyme-cơ chất được đánh giá 24 giờ sau khi truyền.
Có thể phát hiện tín hiệu hoạt động luciferase mạnh rõ ràng, nghĩa là protein luciferase được biểu hiện một cách hiệu quả, cho thấy độ tinh khiết của mẫu phiên mã có thể đáp ứng đầy đủ yêu cầu chuẩn bị mRNA chất lượng cao.
Xét nghiệm tỷ lệ Plasmid siêu tải
Xác nhận biểu hiện mRNA luciferase trong ống nghiệm