Quá trình chuẩn bị CircRNA yêu cầu RNA tuyến tính làm nguyên liệu tiền chất (tiền chất RNA) để tạo vòng, trong đó tiền chất RNA thường được điều chế bằng cách sử dụng DNA plasmid được tuyến tính hóa làm mẫu phiên mã và phiên mã in vitro với sự trợ giúp của T7 RNA polymerase.
DNA plasmid chất lượng cao rất cần thiết cho quá trình sao chép in vitro (IVT). Dựa trên nền tảng dịch vụ chuẩn bị plasmid trưởng thành, Yaohai Bio-Pharma có thể cung cấp dịch vụ chuẩn bị DNA plasmid (pDNA) tuyến tính tiêu chuẩn và có độ tinh khiết cao để đảm bảo tính toàn vẹn của các sản phẩm IVT.
Quy trình xét duyệt | Dịch vụ tùy chọn | Chi tiết dịch vụ | Thời gian giao hàng (Ngày làm việc) |
Chuẩn bị plasmid tròn | tổng hợp gen | Tổng hợp gen (bên thứ ba) | 7-10 |
khuếch đại plasmid | khuếch đại plasmid | 2 | |
Chiết xuất plasmid | |||
Chuẩn bị plasmid tuyến tính hóa | Tuyến tính hóa và tinh chế plasmid | Tuyến tính hóa plasmid | 1 |
Tinh lọc DNA tuyến tính hóa | |||
Kiểm soát chất lượng DNA plasmid | Độ tinh khiết nồng độ | Đo quang phổ tia cực tím (UV) | 1-2 |
cấu trúc plasmid | Điện di trên gel agarose (AGE) | ||
Điện di mao mạch (CE)-tùy chọn | |||
Xác định plasmid | Nhận dạng enzyme giới hạn/ AGE |
Lựa chọn linh hoạt các phương pháp tuyến tính hóa
Tối ưu hóa phương pháp tách chiết và tinh sạch DNA để đạt tỷ lệ thu hồi cao.
Các tiêu chuẩn kiểm soát quy trình nghiêm ngặt, với tỷ lệ hình dạng siêu xoắn của các mẫu plasmid cho nghiên cứu trên 80%.
Dịch vụ chuẩn bị và kiểm soát chất lượng plasmid tiêu chuẩn và hiệu quả cao nhằm đáp ứng nhu cầu thí nghiệm.
Lấy sản phẩm mCherry CircRNA của Yaohai Bio-Pharma làm ví dụ, tỷ lệ siêu tải của các mẫu plasmid mẫu phiên mã (cấp nghiên cứu) là hơn 70%, với tỷ lệ tuyến tính hóa gần 100%.
mCherry CircRNA được điều chế bằng plasmid được tuyến tính hóa làm mẫu và được chuyển vào các tế bào 293T. Mức độ biểu hiện huỳnh quang cao (huỳnh quang đỏ) được phát hiện sau 24 giờ truyền máu, biểu hiện này sẽ được tăng cường sau 48 giờ và vẫn có thể được phát hiện vào ngày thứ 7 và ngày thứ 14 sau khi truyền máu.
Protein mCherry được biểu hiện ổn định và hiệu quả, độ tinh khiết của mẫu phiên mã có thể đáp ứng yêu cầu sản phẩm thuốc CircRNA (DP) với chất lượng cao.
Xác nhận biểu hiện in vitro của mCherry CircRNA