Giới hạn đầu 5' là một biến thể thiết yếu của mRNA. các mRNA có cấu trúc nắp, đặc biệt là cấu trúc Cap1, tạo điều kiện cho các mRNA trốn tránh các phản ứng miễn dịch bẩm sinh trong cơ thể, dẫn đến dịch mã protein hiệu quả.
Đóng nắp bằng enzym (phương pháp hai bước) là phương pháp đóng nắp mRNA thông thường, tương tự như quá trình đóng nắp ở sinh vật nhân chuẩn. Dưới tác dụng của một loạt enzyme, 7-methylguanine (m7G) được liên kết với đầu 5' của mRNA thông qua liên kết triphosphate 5'-5' và trải qua quá trình biến đổi methyl hóa để tạo thành cấu trúc nắp Cap 1 (m7GpppN).
Sơ đồ hình thành cấu trúc nắp tự nhiên
Dòng phản ứng đóng nắp enzyme như sau:
DNA plasmid được tuyến tính hóa được sử dụng làm khuôn mẫu cho phiên mã in vitro (IVT) với sự có mặt của T7 polymerase và mRNA có cấu trúc nắp đầu 5' được hình thành sau quá trình tinh chế một bước bằng cách sử dụng enzyme phủ vaccinia và 2'-O -methyltransferase.
Dịch vụ tùy chọn | Chi tiết dịch vụ | Thời gian giao hàng (Ngày) |
giới hạn enzyme mRNA | Phản ứng đóng nắp enzyme | 1 |
Tối ưu hóa phản ứng đóng nắp - tùy chọn | Thiết kế và tối ưu hóa thành phần phản ứng | 3 ~ 7 |
Thành phần phản ứng đóng nắp được tối ưu hóa và việc sản xuất bản phiên mã mRNA được tăng lên rất nhiều.
MRNA bị giới hạn được chuyển vào các tế bào 293T và có thể phát hiện được biểu hiện của protein mục tiêu.
Thông qua việc kiểm soát chặt chẽ môi trường thí nghiệm RNaseson và vật tư tiêu hao, sự suy giảm mRNA được ngăn chặn một cách hiệu quả.
Nền tảng mRNA của Yaohai Bio-Pharma đã xây dựng một quy trình phản ứng đóng nắp hoàn hảo.
Đối với eGFP mRNA, tiền sản phẩm mRNA được điều chế bằng cách gắn enzyme, tín hiệu huỳnh quang eGFP (huỳnh quang màu xanh lá cây) ở mức cao có thể được quan sát thấy sau khi truyền tế bào 293T trong 24 giờ, được phát hiện bởi Western Blot (WB), chứng minh rằng protein huỳnh quang màu xanh lá cây tăng cường protein mục tiêu (eGFP) có thể được biểu hiện một cách hiệu quả trong ống nghiệm.
Biểu hiện của mRNA eGFP có nắp enzyme trong tế bào 293T