So với phương pháp đóng nắp enzyme hai bước, phương pháp đóng nắp đồng phiên mã một bước có thể làm giảm đáng kể quy trình. Phương pháp này hướng đến kết quả và liên quan đến việc bổ sung các chất tương tự nắp vào phản ứng phiên mã in vitro (IVT). Các chất tương tự nắp có thể được đưa vào khi bắt đầu phiên mã và mRNA có cấu trúc nắp có thể thu được sau khi hoàn thành phiên mã. Các chất tương tự nắp thế hệ thứ ba hiện tại có thể tránh giới hạn ngược và thêm trực tiếp cấu trúc Cap 1 vào sản phẩm phiên âm.
Để xem xét khả năng sinh miễn dịch mRNA in vivo và hiệu quả dịch mã, quy trình IVT thường sử dụng một số loại NTP biến đổi nhất định và các nucleotide biến đổi phổ biến là pseudouridine (Ψ), N1-methyl-pseudouri-dine (N1Ψ) và 5-methylcytosine (5mC) .
Hình: Sơ đồ phản ứng đồng phiên mã và đóng nắp mRNA
Chi tiết dịch vụ
Dịch vụ | Chi tiết dịch vụ | Thời gian giao hàng (Ngày làm việc) |
Giới hạn đồng phiên mã | Phản ứng sao chép in vitro (Clean Cap analog) | 1-2 |
| Biến đổi nucleotide (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Loại bỏ mẫu DNA (DNase I) |
Tối ưu hóa điều kiện IVT - tùy chọn | Thiết kế và tối ưu hóa thành phần phản ứng | 3-7 |
Các tính năng của chúng tôi
- Chiến lược sửa đổi nucleotide đa dạng
Nhiều chiến lược sửa đổi nucleotide tùy chọn có thể cải thiện biểu hiện protein.
- Hệ thống phản ứng tối ưu hóa
Đạt được tỷ lệ phiên mã cao và hiệu quả giới hạn cao.
- Quá trình giới hạn ổn định
Đạt tỷ lệ giới hạn trên 95%.
Ngăn chặn sự phân hủy mRNA một cách hiệu quả bằng cách kiểm soát chặt chẽ RNase trong môi trường thí nghiệm và vật tư tiêu hao.
nghiên cứu trường hợp
Yaohai Bio-Pharma đã xây dựng một nền tảng quy trình giới hạn đồng phiên mã hoàn thiện, sử dụng các chất tương tự nắp sạch để thêm trực tiếp cấu trúc Cap1 đồng thời tránh giới hạn ngược. Sau khi phát hiện tiền xử lý mẫu chuẩn hóa và điện di mao mạch (CE), tỷ lệ giới hạn của mRNA protein huỳnh quang màu xanh lá cây (eGFP) tăng cường có thể đạt hơn 95%.
Hiệu suất giới hạn eGFP mRNA trên 95%
MRNA eGFP và mCherry mCherry được chuẩn bị bằng phương pháp giới hạn đồng phiên mã được chuyển tương ứng vào các tế bào 293T và tín hiệu huỳnh quang mạnh được quan sát thấy sau 48 giờ, cho thấy rằng mRNA được biểu hiện một cách hiệu quả trong các tế bào 293T.
Biểu hiện của eGFP mRNA và mCherry mRNA trong tế bào 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
KHÔNG
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
