MRNA tròn (circRNA) đã được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu về chức năng gen hoặc protein. Trong khi đó, nó phổ biến trong việc phát triển sinh học phòng ngừa và điều trị, tương tự như mRNA.
Yaohai Bio-Pharma đã thiết lập một bộ công nghệ tổng hợp CircRNA để cung cấp RNA chất lượng cao, chẳng hạn như thiết kế và tối ưu hóa trình tự, phiên mã in vitro (IVT), tuần hoàn hóa/chu kỳ hóa, tinh chế và đóng gói hạt nano lipid (LNP). Tất cả các sản phẩm được phát hành theo tiêu chuẩn kiểm soát chất lượng (QC) nghiêm ngặt.
So với mRNA tuyến tính, RNA tuần hoàn (circRNA) có cấu trúc ổn định hơn và là điểm nóng chính trong nghiên cứu thuốc axit nucleic hiện nay. Nó có nhiều ứng dụng trong các lĩnh vực khác nhau, cho dù là CircRNA mã hóa hay CircRNA không mã hóa, bao gồm vắc xin dự phòng các bệnh truyền nhiễm, vắc xin điều trị ung thư, thuốc điều trị ung thư, liệu pháp thay thế protein, y học tái tạo, liệu pháp tế bào và gen (CGT) , vai trò bọt biển phân tử và aptamer RNA.
Quy trình xét duyệt | Dịch vụ tùy chọn | Chi tiết dịch vụ | Thời gian giao hàng (ngày) |
Thiết kế và tối ưu hóa trình tự CircRNA | Thiết kế và tối ưu hóa trình tự mã hóa | Tối ưu hóa mã CDS | 1 |
Thiết kế và tối ưu hóa các chuỗi không mã hóa | Trình tự Intron và Exon, Thiết kế và tối ưu hóa cánh tay tương đồng và miếng đệm | 1-2 | |
Chuẩn bị Plasmid tròn | Tổng hợp gen | Tổng hợp gen (Bên thứ ba) | 7-10 |
Khuếch đại Plasmid | Khuếch đại Plasmid | 2 | |
Chiết xuất Plasmid | |||
Chuẩn bị Plasmid tuyến tính | Tuyến tính hóa và tinh chế Plasmid | Tuyến tính hóa plasmid | 1 |
Tinh chế DNA tuyến tính | |||
Phiên mã và chu kỳ trong ống nghiệm | Phiên mã và chu kỳ trong ống nghiệm | Phản ứng phiên mã và chu kỳ trong ống nghiệm | 1-2 |
Tiêu hóa RNase R | |||
Tối ưu hóa-tùy chọn | Thành phần phản ứng, tối ưu hóa thời gian | 2-5 | |
Tinh chế CircRNA | Phương pháp thanh lọc thông thường | Lượng mưa liti clorua | 1 |
Làm sạch hạt từ tính | 1 | ||
Tinh chế CircRNA có độ tinh khiết cao | Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) | 1-2 | |
Trao đổi bộ đệm | Siêu lọc | 1 | |
CircRNA đông khô | Điền mẫu | Điền | 2-3 |
Đông khô | đóng băng trước | ||
Sấy sơ cấp (Thăng hoa) | |||
Sấy thứ cấp (Giải hấp) | |||
Đóng gói CircRNA-LNP | Đóng gói LNP | Tiền xử lý vật liệu và chất lỏng | 2 |
Trộn thiết bị vi lỏng | |||
Trao đổi bộ đệm | Lọc dòng tiếp tuyến | 1 | |
Khử trùng | Lọc | ||
Kiểm soát chất lượng DNA Plasmid | Nồng độ/độ tinh khiết | Đo quang phổ tia cực tím (UV) | 1-2 |
cấu trúc plasmid | Điện di trên gel agarose (AGE) | ||
Điện di mao mạch (CE) -Tùy chọn | |||
Xác định plasmid | Nhận dạng enzyme hạn chế/TUỔI | ||
Kiểm soát chất lượng của CircRNA | Nồng độ/độ tinh khiết | Đo quang phổ tia cực tím (UV) | - |
Tinh khiết | Điện di trên gel Agarose (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC-tùy chọn | 1 | ||
Kiểm soát chất lượng của CircRNA-LNP | Hiệu quả đóng gói | Phương pháp RiboGreen | 1 |
Kích thước hạt | Tán xạ ánh sáng động (DLS) | 1 | |
Chỉ số polydispersity | Tán xạ ánh sáng động (DLS) | 1 | |
Zeta tiềm năng | Tán xạ ánh sáng động (DLS) | 1 | |
Xét nghiệm hiệu lực dựa trên tế bào | Truyền tế bào | Mạ tế bào, truyền tế bào | 4 |
Phát hiện protein mục tiêu | Quan sát huỳnh quang, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Chúng tôi đã chuyển CircRNA protein huỳnh quang màu xanh lá cây tăng cường (eGFP CircRNA), mCherry CircRNA, luciferase CircRNA vào các tế bào 293T và phát hiện protein mục tiêu thông qua tín hiệu huỳnh quang, phát quang hoặc màu sắc, Western blot (WB), xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme (ELISA).
Xét nghiệm hiệu lực dựa trên tế bào của các mẫu CircRNA của Yaohai Bio-Pharma