Trong quá trình chuẩn bị mRNA chuyển lục in vitro (IVT), DNA plasmid tuyến tính được yêu cầu làm mẫu cho quá trình chuyển lục IVT với sự hỗ trợ của polymerase RNA T7. DNA plasmid chất lượng cao là yếu tố then chốt cho việc chuyển lục in vitro.
Dựa trên nền tảng dịch vụ chuẩn bị plasmid đã phát triển, Yaohai Bio-Pharma có thể cung cấp dịch vụ chuẩn bị DNA plasmid tuyến tính với độ tinh khiết và tiêu chuẩn cao để đạt được hiệu quả chuyển lục IVT tốt nhất.
Quy trình | Dịch vụ tùy chọn | Chi Tiết Dịch Vụ | Thời gian Giao hàng (ngày làm việc) |
Chuẩn Bị Plasmid Vòng | Hợp thành gen | Hợp thành Gen (Bên thứ ba) | 7-10 |
Phóng đại Plasmid | Phóng đại Plasmid | 2 | |
Chiết xuất Plasmid | |||
Chuẩn bị Plasmid tuyến tính | Khiến plasmid trở thành dạng tuyến tính và tinh chế | Phân mảnh plasmid | 1 |
Tinh chế DNA Tuyến tính | |||
Kiểm soát chất lượng DNA plasmid | Độ tinh khiết nồng độ | Quang phổ tia cực tím (UV) | 1-2 |
Kiểu plasmid | Chạy điện泳 trên gel agarose (AGE) | ||
Điện di mao quản (CE) - Tùy chọn | |||
Xác định plasmid | Xác định enzyme hạn chế / AGE |
Chọn phương pháp tuyến tính linh hoạt
Tối ưu hóa phương pháp chiết xuất và tinh chế DNA để đạt được tỷ lệ thu hồi cao.
Tiêu chuẩn kiểm soát quy trình nghiêm ngặt, với tỷ lệ cấu hình siêu cuộn của mẫu plasmid cho nghiên cứu trên 80%.
Dịch vụ chuẩn bị và kiểm soát chất lượng plasmid có tiêu chuẩn cao và hiệu quả cao để đáp ứng nhu cầu thí nghiệm.
Lấy ví dụ sản phẩm mRNA_luciferase của Yaohai Bio-Pharma, mẫu plasmid làm khuôn chuyển bản (cấp độ nghiên cứu) có tỷ lệ siêu xoắn trên 90%, tỷ lệ tuyến tính gần 100%, và tỷ lệ chuyển bản sau đó lên đến 1:200 (DNA plasmid tuyến tính:mRNA).
MRNA_luciferase thu được thông qua việc chuẩn bị plasmid tuyến tính hóa làm bản mẫu được chuyển vào tế bào 293T, và hoạt tính phản ứng enzym-substrate được đánh giá sau 24 giờ chuyển nhiễm.
Có thể phát hiện được tín hiệu hoạt tính luciferase mạnh rõ ràng, tức là protein luciferase được biểu hiện hiệu quả, điều này cho thấy độ tinh khiết của bản mẫu chuyển tự có thể hoàn toàn đáp ứng yêu cầu của việc chuẩn bị mRNA chất lượng cao.
Phương pháp đánh giá tỷ lệ plasmid siêu cuộn
Xác nhận biểu hiện mRNA luciferase trong môi trường in vitro