việc gắn nắp ở đầu 5' là một sửa đổi thiết yếu của mRNA. Các mRNA có cấu trúc nắp, đặc biệt là cấu trúc Cap1, giúp mRNA tránh được phản ứng miễn dịch bẩm sinh trong cơ thể, dẫn đến sự dịch mã protein hiệu quả.
Gắn nắp enzym (phương pháp hai bước) là phương pháp gắn nắp mRNA truyền thống, tương tự như quá trình gắn nắp trong sinh vật nhân thực. Dưới tác động của một loạt enzym, 7-methylguanine (m7G) được liên kết với đầu 5' của mRNA thông qua liên kết triphosphat 5'-5' và trải qua quá trình methylation để hình thành cấu trúc nắp Cap 1 (m7GpppN).
Sơ đồ về quá trình hình thành cấu trúc nắp tự nhiên
Quy trình phản ứng gắn nắp enzym diễn ra như sau:
Plasmid DNA tuyến tính được sử dụng làm mẫu cho quá trình phiên mã in vitro (IVT) trong sự hiện diện của polymerase T7, và mRNA với cấu trúc nắp đầu 5' được hình thành sau khi tinh chế một bước bằng enzyme gắn nắp vaccinia và methyltransferase 2'-O.
Chi tiết Dịch vụ
Dịch vụ tùy chọn |
Chi Tiết Dịch Vụ |
Thời gian giao hàng (Ngày) |
đóng nắp enzymatic mRNA |
Phản ứng đắp nắp enzym |
1 |
Tối ưu hóa phản ứng đắp nắp - tùy chọn |
Thiết kế và tối ưu hóa thành phần phản ứng |
3~7 |
Tính năng của chúng tôi
- Thiết kế và tối ưu hóa thành phần phản ứng đắp nắp
Thành phần phản ứng đắp nắp đã được tối ưu hóa, và sản lượng mRNA bản sao được tăng đáng kể.
- Xác minh biểu hiện in vitro
MRNA đã đắp nắp được chuyển vào tế bào 293T, và có thể phát hiện biểu hiện protein mục tiêu.
- Kiểm soát nghiêm ngặt RNase
Qua việc kiểm soát nghiêm ngặt RNase trong môi trường thí nghiệm và vật tư tiêu hao, sự phân hủy của mRNA được ngăn chặn hiệu quả.
Nghiên cứu trường hợp
Nền tảng mRNA của Yaohai Bio-Pharma đã xây dựng một quy trình phản ứng đắp nắp hoàn chỉnh.
Đối với mRNA eGFP, một tiền sản phẩm mRNA được chuẩn bị bằng cách mũ hóa enzym, có thể quan sát thấy tín hiệu huỳnh quang eGFP (huỳnh quang màu xanh lá cây) ở mức cao sau khi chuyển gen vào tế bào 293T trong 24 giờ, điều này được phát hiện bởi phương pháp Western Blot (WB), chứng minh rằng protein đích là protein huỳnh quang xanh tăng cường (eGFP) có thể được biểu hiện hiệu quả trong môi trường in vitro.
Biểu hiện của mRNA eGFP được mũ hóa enzym trong tế bào 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
