So với phương pháp thêm mũ enzym hai bước, phương pháp thêm mũ đồng phiên mã một bước có thể làm giảm đáng kể quy trình. Phương pháp này hướng đến kết quả và bao gồm việc thêm các chất tương tự mũ vào phản ứng phiên mã in vitro (IVT). Chất tương tự mũ có thể được giới thiệu ngay từ đầu quá trình phiên mã, và mRNA có cấu trúc mũ có thể thu được sau khi hoàn thành phiên mã. Hiện tại, thế hệ thứ ba của chất tương tự mũ có thể tránh hiện tượng thêm mũ ngược và trực tiếp thêm cấu trúc Mũ 1 vào sản phẩm phiên mã.
Đối với việc xem xét tính miễn dịch trong cơ thể của mRNA và hiệu suất dịch, quá trình IVT thường sử dụng một số loại NTP đã được sửa đổi, và các nucleotide được sửa đổi phổ biến là pseudouridine (Ψ), N1-methyl-pseudouridine (N1Ψ) và 5-methylcytosine (5mC).
Hình: Sơ đồ phản ứng đồng phiên mã và thêm mũ mRNA
Chi Tiết Dịch Vụ
Dịch vụ |
Chi Tiết Dịch Vụ |
Thời gian Giao hàng (ngày làm việc) |
Thêm mũ đồng phiên mã |
Phản ứng phiên mã in vitro (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Sửa đổi nucleotide (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Loại bỏ mẫu DNA (DNase I) |
Tối ưu hóa điều kiện IVT - tùy chọn |
Thiết kế và tối ưu hóa thành phần phản ứng |
3-7 |
Tính năng của chúng tôi
- Các chiến lược sửa đổi nucleotide đa dạng
Nhiều chiến lược sửa đổi nucleotide tùy chọn có thể cải thiện biểu hiện protein.
- Hệ thống Phản ứng Đã được Tối ưu hóa
Đạt tỷ lệ phiên mã cao và hiệu suất gắn mũ cao.
Đạt tỷ lệ đậy nắp hơn 95%.
- Kiểm soát nghiêm ngặt RNase
Ngăn ngừa hiệu quả sự phân hủy của mRNA bằng cách kiểm soát nghiêm ngặt RNase trong môi trường thí nghiệm và vật tư tiêu hao.
Nghiên cứu trường hợp
Yaohai Bio-Pharma đã xây dựng một nền tảng quy trình đậy nắp đồng phiên chín chắn, sử dụng các chất tương tự mũ sạch để thêm cấu trúc Cap1 trực tiếp mà tránh được việc đậy ngược. Sau khi xử lý mẫu theo chuẩn và phát hiện bằng điện di mao quản (CE), tỷ lệ đậy nắp của mRNA tăng cường protein huỳnh quang xanh (eGFP) có thể đạt hơn 95%.
hiệu suất đậy nắp mRNA eGFP hơn 95%
MRNA eGFP và mRNA mCherry được chuẩn bị thông qua quá trình đậy nắp đồng phiên được chuyển vào tế bào 293T lần lượt, và sau 48 giờ quan sát thấy tín hiệu huỳnh quang mạnh, cho thấy rằng mRNA được biểu hiện hiệu quả trong tế bào 293T.
Biểu hiện mRNA eGFP và mRNA mCherry trong tế bào 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
