Tất cả danh mục
ENEN
Bản chép in vitro, IVT

Bản chép in vitro, IVT

Trang chủ >  IVT RNA  >  Hợp Thành RNA Theo Yêu Cầu  >  Hợp Thành mRNA Theo Yêu Cầu  >  Bản chép in vitro, IVT

IVT RNA

IVT, Chuyển bản thể外

Về việc sản xuất hàng loạt mRNA, chuyển bản thể外 (IVT) là một phương pháp hiệu quả và chín chắn hơn. Phản ứng IVT sử dụng plasmid DNA tuyến tính chứa promoter T7 làm mẫu, và mRNA được tổng hợp với nucleoside triphosphates (NTPs) làm chất nền trong sự hiện diện của polymerase RNA T7.

Sửa đổi nucleotide là một bước đột phá trong việc nghiên cứu mRNA, nơi các phân tử mRNA chưa được sửa đổi bị nhận diện bởi các cảm biến RNA nội bào để kích hoạt miễn dịch bẩm sinh. Đối với việc xem xét tính miễn dịch in vivo của mRNA và hiệu suất phiên dịch, quá trình IVT thường sử dụng một số loại NTPs đã được sửa đổi, và các nucleotide được sửa đổi phổ biến là pseudouridine (Ψ), N1-methyl-pseudouridine (N1Ψ), và 5-methylcytosine (5mC).

undefined

Quy trình Chuyển bản Thể Ngoại của mRNA

图片

Sơ đồ phản ứng chuyển bản thể ngoại (IVT)

Chi tiết Dịch vụ
Dịch vụ tùy chọn
Chi Tiết Dịch Vụ
Thời gian Giao hàng (ngày làm việc)
Chuyển bản vitro (IVT)
IVT, Chuyển bản thể外 1
Sửa đổi nucleotide (Ψ/N1Ψ/5mC, v.v.)
Loại bỏ mẫu DNA (DNase I)
Tối ưu hóa điều kiện IVT - tùy chọn
Thiết kế và tối ưu hóa thành phần phản ứng IVT 2-5
Tính năng của chúng tôi
  • Các chiến lược sửa đổi nucleotide đa dạng

Cải thiện sự ổn định của mRNA và biểu hiện protein trong vivo.

  • Thiết kế và tối ưu hóa bài kiểm tra nghiêm ngặt

có thể đạt được việc chuẩn bị mảnh mRNA lên đến 10kb.

  • Chuyển bản hiệu quả

Bằng cách tối ưu hóa điều kiện phản ứng IVT, tốc độ phiên mã đạt tới tỷ lệ 1:200.

  • Kiểm soát nghiêm ngặt RNase

Kiểm soát nghiêm ngặt RNase thông qua môi trường thí nghiệm và vật tư tiêu hao có thể ngăn ngừa hiệu quả sự phân hủy của mRNA.

Nghiên cứu trường hợp

Hệ thống phản ứng IVT hiện tại được tối ưu hóa thô cho các hệ thống tổng hợp có độ dài khoảng 100 nt, không phải cho mRNA có độ dài tùy ý. Độ dài chuỗi mRNA càng lớn, việc phiên mã càng khó khăn và mRNA càng dễ bị phân hủy.

Để chuẩn bị các chuỗi mRNA tùy chỉnh có độ dài khoảng 10 kb, Yaohai Bio-Pharma đã thành công trong việc chuẩn bị các mẫu chất lượng cao với tỷ lệ phiên mã cao 1:135 và thu được 135 μg mRNA sản phẩm được tinh chế sơ bộ sau khi 1 μg plasmid tuyến tính được phiên mã in vitro thông qua thiết kế thí nghiệm nghiêm ngặt, tối ưu hóa liên tục điều kiện phản ứng và kiểm soát chặt chẽ RNase.

图片

xác định mRNA (Chạy điện泳 trên gel agarose)

Nhận Báo Giá Miễn Phí

Get in touch