Yaohai Bio-Pharma chuẩn bị circRNA dựa trên hệ thống PIE (căn chỉnh exon và intron), điều này dựa vào chức năng tự cắt của intron loại I để đạt được sự cycl hóa RNA. Cấu trúc PIE được thiết kế sử dụng gene T4 td hoặc gene tiền chất tRNA cá, và sắp xếp như sau:
Intron RNA và mảnh exon hỗ trợ được chia thành hai phần (phần đầu 5' và phần cuối 3'), trong đó chuỗi đầu 5' được chuyển đến đuôi của chuỗi đích, chuỗi cuối 3' được chèn vào trước chuỗi đích, và chuỗi gene đích được chèn ở giữa.
Dưới sự xúc tác của GTP, cấu trúc PIE dẫn đến sự cycl hóa của các chuỗi ngoài intron. Kết hợp với chiến lược tăng cường hợp lý về tỷ lệ cycl hóa, Yaohai Bio-Pharma có thể đạt được sự cycl hóa của các chuỗi lên tới 4 kb với tỷ lệ cycl hóa hơn 80%.
Hình 1. Sự lưu thông in vitro của circRNA dựa trên hệ thống PIE
Chi tiết Dịch vụ
| Quy trình |
Dịch vụ tùy chọn |
Chi Tiết Dịch Vụ |
Thời gian Giao hàng (ngày làm việc) |
| thiết kế và tối ưu hóa chuỗi circRNA |
Thiết kế và tối ưu hóa chuỗi mã hóa |
Căn chỉnh chuỗi CDS
Tối ưu hóa mật mã CDS
|
1 |
| Thiết kế và tối ưu hóa các chuỗi không mã hóa |
Thiết kế và tối ưu hóa chuỗi intron và exon
Thiết kế và tối ưu hóa chuỗi tay đồng dạng
Thiết kế và tối ưu hóa chuỗi Spacer
|
1-2 |
Các Chiến Lược Thường Dùng cho Thiết Kế Chuỗi mRNA
| Các thành phần của CircRNA |
Chức Năng Sinh Học |
Chiến lược tối ưu hóa |
| Chuỗi intron và exon hai đầu |
Tự cắt nối intron được xúc tác bởi GTP để cycl hóa các chuỗi bên ngoài intron. |
Được thiết kế dựa trên gen T4 td hoặc gen tiền chất tRNA dầu cá. |
| Mã hóa |
IRES |
Điểm nhận ribosome nội bộ điều chỉnh sự dịch chuyển của circRNA. |
Lọc các chuỗi điểm vào ribosome nội bộ (IRES) từ các nguồn virus khác nhau, ví dụ như EMCV, nguồn CVB3. |
| CDS |
Khu vực mã hóa protein, chuỗi mã hóa cho kháng nguyên, kháng thể hoặc protein chức năng khác. |
Tối ưu hóa codon tăng cường mức độ dịch chuyển; một số codon không tối ưu có thể đóng vai trò trong quá trình gấp protein. |
| Không mã hóa |
Chuỗi không mã hóa |
Nhắm đến miRNA hoặc protein để thực hiện điều hòa gen hoặc protein. |
Nhắm vào các vị trí gắn cụ thể cho miRNA hoặc protein có thể lặp lại các chuỗi của vị trí gắn đó. |
Tính năng của chúng tôi
- Hệ thống Tối ưu Hóa PIE Cyclization kết hợp với các chiến lược tối ưu hóa hợp lý để đạt tỷ lệ cyclization hơn 80%;
- Phối hợp Đội Tối ưu Hóa CDS Công nghệ Tiên tiến với đội ngũ thuật toán AI chuyên nghiệp để hoàn thành việc tối ưu hóa codon khu vực CDS;
- Quy trình circRNA Chín Muồi và Hoàn Hảo có thể đạt được với hiệu suất cyclization cao, độ ổn định cao và hiệu suất dịch chuyển cao.
Nghiên cứu trường hợp
Yaohai Bio-Pharma đã ra mắt sản phẩm đối chứng tăng cường protein huỳnh quang xanh (eGFP) dạng circRNA, dựa trên hệ thống PIE để đạt được quá trình cycl hóa của RNA.
Sử dụng chất chuyển gen thông thường, eGFP circRNA được chuyển vào tế bào 293T, và có thể phát hiện tín hiệu huỳnh quang eGFP (màu xanh) sau 24 giờ, tín hiệu này sẽ được tăng cường sau 48 giờ. Tín hiệu huỳnh quang vẫn có thể được phát hiện vào ngày thứ 7 và ngày thứ 14 sau khi chuyển gen.
Xác thực biểu hiện in vitro của eGFP circRNA
VI
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
