Các sản phẩm thu được từ quá trình cyclization in vitro và làm giàu bằng RNase R cần phải loại bỏ thêm các thành phần từ quá trình phiên mã in vitro (IVT), bao gồm các chất nền chưa tiêu thụ trong phản ứng cyclization, sản phẩm phụ của phản ứng và RNA bị đứt đoạn.
Yaohai Bio-Pharma có các giải pháp đa dạng để tinh chế circRNA một cách hiệu quả, bao gồm phương pháp kết tủa LiCl, tinh chế bằng hạt từ tính, và các phương pháp tự phát triển nhằm loại bỏ nhiều loại tạp chất và chuẩn bị circRNA có độ tinh khiết cao.
Giải pháp tinh chế cho lượng nhỏ circRNA dùng cho việc chuyển nhiễm tế bào và là một phần của thí nghiệm trên động vật.
Giải pháp tinh chế cho lượng nhỏ circRNA dùng cho việc chuyển nhiễm tế bào và là một phần của thí nghiệm trên động vật.
Áp dụng trong các tình huống yêu cầu chất lượng cao hơn;
Quy trình tinh chế ổn định và có thể mở rộng để đáp ứng yêu cầu sản xuất GMP.
Quy trình | Dịch vụ tùy chọn | Chi Tiết Dịch Vụ | Thời gian giao hàng (Ngày) | Các kết quả đạt được |
tinh khiết circRNA | Giải pháp tinh chế thông thường | Tụ tập lithium chloride | 1 | chất hoạt động dược circRNA |
Tinh chế bằng magnetic bead | ||||
Tinh chế circRNA Siêu Sạch | lý thuyết lỏng hiệu năng cao chuẩn bị (HPLC) | 1-2 | ||
Trao đổi đệm | Ultrafiltration | 1 | ||
Kiểm soát chất lượng circRNA | Chế độ nồng độ/thuần hóa | Quang phổ tia cực tím (UV) | 0.5 | Báo cáo thử nghiệm |
Tính tinh khiết | Phân tích điện di trên gel agarose (AGE)/E-Gel | |||
HPLC - Tùy chọn | 1 |
Các kịch bản ứng dụng có thể đạt được.
circRNA với độ tinh khiết hơn 90%;
Thông qua việc kiểm soát nghiêm ngặt RNases trong môi trường thí nghiệm và vật tư tiêu hao, sự phân hủy RNA được ngăn chặn hiệu quả.
Yaohai Bio-Pharma đã thiết lập một giải pháp tinh chế circRNA chín muồi có thể loại bỏ hiệu quả các tạp chất liên quan đến quy trình.
Các sản phẩm RNA vòng được tinh chế bằng phương pháp thông thường vẫn rõ ràng bị trộn lẫn với RNA bị đứt đoạn và intron.
Sau khi sử dụng dung dịch tinh chế do Yaohai Bio-Pharma phát triển, các tạp chất RNA tuyến tính khác nhau như RNA bị đứt đoạn và intron có thể được loại bỏ thành công.
Xác nhận Biểu hiện circRNA
Sử dụng liposome thông thường, circRNA eGFP đã được tinh chế chuyển vào tế bào 293T, và tín hiệu huỳnh quang được quan sát sau 24 giờ và tiếp tục tăng cường ở thời điểm 48 giờ. Tín hiệu huỳnh quang vẫn có thể được phát hiện vào ngày thứ 7 và ngày thứ 14 sau khi chuyển gen.