Thử nghiệm hiệu lực dựa trên tế bào
Ý nghĩa của phương pháp đánh giá hiệu lực mRNA
Với sự phát triển nhanh chóng của vắc xin và liệu pháp mRNA, cần có một bảng phân tích cụ thể để kiểm tra hiệu lực (xác định hoạt động sinh học của chúng), bao gồm hiệu suất dịch mã của mRNA. Các phương pháp này thường dựa trên việc chuyển gen vào tế bào và các bài kiểm tra chức năng của protein đích.
Yaohai Bio-Pharma cung cấp phương pháp đánh giá hiệu lực dựa trên tế bào cho chất dược phẩm mRNA hoặc sản phẩm LNP, bao gồm việc chuyển gen vào tế bào (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 cells, v.v.) và các bài kiểm tra ELISA hoặc Western Blotting (WB).
Yêu cầu quy định đối với phương pháp đánh giá hiệu lực
Theo các cân nhắc quy định của WHO, “Khả năng hoạt động của mỗi lô vaccine cuối cùng nên được xác định bằng phương pháp chức năng định lượng và đã được kiểm chứng phù hợp. Các bài kiểm tra khả năng hoạt động in vitro có thể bao gồm các hệ thống chuyển gen dựa trên tế bào hoặc các bài kiểm tra không có tế bào.” Và USP khuyến nghị sử dụng một ‘bài kiểm tra dựa trên tế bào’ để kiểm tra khả năng hoạt động của mRNA, tức là biểu hiện protein mục tiêu.
Phương pháp Phân tích
|
Phân tích
|
Phương pháp
|
|
Các bài kiểm tra Khả năng hoạt động
|
Chuyển gen dựa trên tế bào và nhận dạng protein mục tiêu:
tế bào 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, v.v.
|
Quy trình
Bước 1. Chuyển gen dựa trên tế bào với mRNA hoặc mRNA-LNP
Các tế bào được nuôi cấy và chuyển gen với mRNA hoặc mRNA-LNP. Cụ thể, mRNA được chuyển gen sau khi được trộn với chất hỗ trợ chuyển gen, trong khi mRNA-LNP được chuyển trực tiếp vào tế bào. Sau 24-48 giờ, làm rõ siêu dịch chứa protein đã biểu hiện bằng cách ly tâm.
Bước 2. Các bài kiểm tra chức năng của protein mục tiêu
Thực hiện các bài kiểm tra ELISA hoặc WB để đánh giá sự kết hợp chức năng của các protein mục tiêu.
Nghiên cứu trường hợp
Các bài kiểm tra hiệu lực dựa trên tế bào cho mẫu mRNA
Yaohai-BioPharma đã phát triển phương pháp kiểm tra hiệu lực dựa trên tế bào cho mRNA, bao gồm nuôi cấy tế bào, chuyển gen tế bào và các bài kiểm tra chức năng protein. Chúng tôi đã chuyển gen mRNA eGFP, mRNA mCherry, mRNA luciferase, mRNA protein gai vào tế bào 293T và phát hiện protein mục tiêu thông qua tín hiệu huỳnh quang, phát sáng hoặc màu sắc, WB, ELISA.
Các bài kiểm tra hiệu lực dựa trên tế bào cho sản phẩm mRNA bởi Yaohai Bio-Pharma
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
